Titer dan spesifisitas antibodi pada sel darah merah mempengaruhi keparahan suatu penyakit. Air Susu Ibu (ASI) mengandung sekretori IgA, IgM, dan IgG yang berfungsi sebagai pertahanan pertama untuk melawan infeksi mukosa. Tujuan penelitian ini yaitu untuk melihat gambaran dan pengaruh waktu penyimpanan dari jenis spesimen ASI yang berbeda terhadap titer antibodi golongan darah O. Desain penelitian ini adalah kuasi eksperimen yaitu dibuat dua kelompok spesimen ASI dan supernatan ASI. Kedua kelompok ASI tersebut disimpan pada suhu ruang dengan variasi waktu penyimpanan, kemudian diperiksa menggunakan hemaglutinasi metode tabung. Hasil penelitian dari kelima data pemeriksaan menunjukkan rentang titer antibodi A dan B 1/2 - 1/8. Sedangkan pada supernatan ASI menunjukkan rentang titer antibodi A dan B 1/2 - 1/32, di mana spesimen ASI dan supernatan ASI semakin disimpan lama maka mengalami penurunan titer antibodi. Hasil uji Wilcoxon menunjukkan spesimen ASI dengan nilai p (sig) sebesar 0,034 dan supernatan ASI dengan nilai p (sig) 0,039. Hal ini menunjukkan bahwa terdapat perbedaan titer antibodi pada spesimen ASI dan supernatan ASI yang segera diperiksa dan disimpan selama 4 jam pada suhu ruang. Sedangkan hasil uji Friedman terhadap jenis spesimen ASI menunjukkan p (sig) 0,257 sehingga disimpulkan bahwa distribusi data pemeriksaan titer antibodi tidak terdapat perbedaan yang bermakna.