SUHU INKUBASI MEMPENGARUHI LEVEL EKSPRESI SOX9 PADA TAHAP AWAL PERKEMBANGAN GONAD EMBRIO Chelonia mydas (PENYU HIJAU)

Abstract

Abstrak : Salah faktor penting yang diduga terlibat dalam penentuan jenis kelamin hewan TSD adalah Sox9. Protein ini berperan dalam cascade determinasi seks. Ketika kadar protein Sox9 mencapai nilai ambang tertentu maka gonad indiferen akan memasuki jalur diferensiasi testis. Penelitian ini bertujuan mengamati level ekspresi gen tersebut pada tahap awal perkembangan gonad Chelonia mydas yang termasuk dalam kelompok hewan TSD. Sebagian telur diinkubasi pada suhu 31±1°C untuk menghasilkan 100% individu betina (Suhu Feminisasi, SF), sedangkan telur lainnya diinkubasi pada suhu 26±1°C untuk menghasilkan 100% individu jantan (Suhu Maskulinisasi, SM). Pengamatan dilakukan pada level mRNA yang terekspresi sejak periode pra TSP hingga TSP akhir. Level ekspresi Sf1 kompleks adrenal-gonad-ginjal dari embrio tahap perkembangan 12, 14, 16 (pra TSP), 17, 19 dan 22 (TSP) yang diinkubasi pada suhu feminisasi (31±1°C) atau suhu maskulinisasi (26±1°C) dideteksi dengan menggunakan metode RT-PCR. Sebagai pembanding digunakan housekeeping gene â-actin. Hasil amplifikasi di elektroforesis pada Agarose-TAE kemudian di foto dengan kamera digital. Densitas larik DNA yang terbentuk pada masing-masing tahap perkembangan embrio dan perlakuan ditentukan dengan menggunakan software ScionImage. Rata-rata bacaan pada setiap larik di visualisasi dalam bentuk diagram garis. Hasil RT-PCR menunjukkan bahwa suhu inkubasi mempengaruhi level ekspresi Sox9. Level ekspresi Sox9 tampak lebih tinggi pada embrio yang diinkubasi pada SM (26±1°C) dibandingkan dengan level ekspresi Sox9 embrio yang diinkubasi pada SF (31±1°C). Perbedaan level ekspresi tersebut terlihat sejak tahap pra TSP tengah hingga TSP tengah. Perbedaan terbesar terlihat menjelang embrio memasuki tahap TSP. Perbedaan level ekspresi Sox9 pada tahapan tersebut menunjukkan bahwa Sox9 memainkan peran yang penting dalam proses awal determinasi seks gonad Chelonia mydas.Kata kunci : Sox9, Temperature-dependent Sex Determination (TSD), Thermosensitive period (TSP), Chelonia mydas.