Objetivo: Verificar a demanda de hemoculturas, aspirados traqueais e uroculturas realizadas no HU-UNIVASF/EBSERH e a prevalência dos microrganismos identificados no período de janeiro à junho de 2016. Métodos: Estudo retrospectivo documental com abordagem quantitativa. Resultados: O setor de microbiologia realizou 488 hemoculturas, 427 uroculturas e 197 aspirados traqueais. A positividade de hemoculturas mostrou-se entre 10,9 à 25,7%, e o percentual de contaminações variou de 6,8 à 14,0%. Os microrganismos mais prevalência nas hemoculturas foram Staphylococcus epidermidis (23,7%), Staphylococcus aureus (19,3%) e Klebisiella pneumoniae (9,6%). Nas uroculturas foram Klebisiella pneumoniae (23,1%), Candida sp. (13,5%) e Escherichia coli (12,5%). Nos aspirados traqueais foram Acinetobacter baumannii (29,2%), Pseudomonas aeruginosa (26,6%) e Staphylococcus aureus (16,2%). Conclusão: A cultura mais solicitada foi hemocultura. A bactéria mais prevalente nas hemoculturas foi Staphylococcus epidermidis, nos aspirados traqueais Acinetobacter baumannii e nas uroculturas Klebisiella pneumoniae. Descritores: Hemocultura, microrganismos, infecção hospitalar, prevalência.