<p>La desinfección superficial y la germinación de los propágulos, empleados en inoculantes basados en hongosformadores de micorrizas arbusculares (HFMA), son unrequisito de suma importancia para el exitoso establecimiento de la simbiosis bajo condiciones in vitro. El presente trabajo evaluó un protocolo para establecer un método de desinfección y germinación de esporas y fragmentos de raíces con vesículas del HFMA, Glomus sp. (GEV02) en condiciones in vitro. Se realizó la desinfección de esporasde Glomus sp. (GEV02) utilizando una combinación de varios agentes desinfectantes, a partir del uso de cloramina T, hipoclorito de calcio, y de antibióticos. Para los fragmentosde raíces micorrizados como complemento a la utilizaciónde los agentes desinfectantes mencionados anteriormentese aplicó un tratamiento de ultrasonido antes de realizarel proceso de desinfección. Adicionalmente, se empleó unmétodo de germinación de esporas y fragmentos de raícesmicorrizados de Glomus sp. (GEV02), utilizando diferentes concentraciones de flavonoide 3,5,7,3’,4’-pentahidroxiflavona. Los resultados reflejaron el efecto positivo de losdesinfectantes hipoclorito de calcio (1%), cloramina T (2%)+ 2 gotas de tween 20, seguido de una solución antibiótica que contenía 200 mg de estreptomicina sulfatada y100 mg de gentamicina sulfatada sobre los porcentajes decontaminación de los propágulos infectivos, así como elempleo del flavonoide 3,5,7,3’,4’ pentahidroxi flavona (5μM) durante la germinación. Este estudio permitió contarcon una nueva metodología que garantizó la germinación rápida y exitosa de las esporas y fragmentos de raíces con vesículas del HFMA, Glomus sp. (GEV02) en ausencia de contaminación.</p><p> </p><p><strong>Methodology for the disinfection and germination of spores and fragments of roots inoculated with Glomus sp. (GEV02) for use under in vitro conditions.</strong></p><p>Surface disinfection and germination of propagules, used in inoculants based on arbuscular mycorrhizal fungi (AMF), are a requirement of utmost importance for the successful establishment of symbiosis under in vitro conditions. This study assessed a protocol to establish a method of disinfection and germination of spores and root fragments with vesicles of the AMF Glomus sp. (GEV02) under in vitro conditions. The Glomus sp. (GEV02) spore disinfection was carried out using a combination of several disinfecting agents: chloramine T, hypochlorite, calcium, and antibiotics. For mycorrhized root fragments as a complement to the use of the aforementioned disinfectants, an ultrasound treatment was applied before the disinfection process. In addition,we employed a method of germinating the spores and root fragments my corrhized with Glomus sp. (GEV02) that used different concentrations of flavonoid 3,5,7,3’,4’-pentahidroxiflavone. The results reflected the positive impact of the disinfectants calcium hypochlorite (1%), chloramine T (2%)+ two drops of tween 20, followed by an antibiotic solution containing 200 mg of sulfated streptomycin and 100 mgof sulfated gentamicin, as well as the use of the flavonoid3,5,7,3’,4’-pentahidroxi flavona (5 μM) during germination, on the percentages of contamination of the infective propagules. This study allowed us to establish a new methodology thatensures the rapid and successful germination of spores and root fragments with vesicles of the arbuscular mycorrhizal fungi, Glomus sp. (GEV02) while successfully avoiding contamination.</p>