Os objetivos deste trabalho foram investigar a influência da qualidade da luz no crescimento e no acúmulo de constituintes voláteis de Mentha spicata cultivada in vitro. Segmentos nodais de plântulas já estabelecidas foram mantidos sob lâmpadas fluorescentes e diodos emissores de luz (LEDs) com as regiões espectrais nas cores verde, amarelo, vermelho, azul e branco, e nas combinações entre vermelho e azul (1:1; 2:2 e 2:1). Após 45 dias, parâmetros de crescimento, área foliar, índices de crescimento, pigmentos fotossintéticos e análise da composição química volátil de folhas por headspace – CG/FID foram avaliados. A combinação 1:2 proporcionou maiores biomassas seca de folhas, raiz e total. As plântulas dos tratamentos verde, amarelo, fluorescente e vermelho apresentaram características de estiolamento. Em relação à composição química volátil, os constituintes majoritários α-pineno, sabineno, β-pineno, mirceno, 1,8-cineol e carvona foram identificados. Plântulas crescidas sob LEDs verde e amarelo resultaram maior acúmulo de carvona. Assim, este estudo contribuiu para o entendimento das alterações causadas pela qualidade de luz no crescimento in vitro e na composição química volátil de hortelã. Conclui-se que a micropropagação de Mentha spicata sob LEDs na combinação entre vermelho e azul 1:2 é o mais favorável para o crescimento e teor de carvona e de 1,8-cineol.