The influence of aranoza drug formulations and «empty» liposomes on the expression of PD-L1 и PD-L2 in human melanoma cell lines

Abstract

Введение. В последние годы достигнут значительный прогресс в иммунотерапии опухолей, однако пока мало информации о влиянии химиопрепаратов на взаимодействие опухоли и иммунной системы. Вызывает интерес вопрос о возможности лечения блокаторами PD-1 и его лигандов после химиотерапии. Цель исследования-изучить изменение экспрессии матричной РНК (мРНК) и поверхностных молекул PD-L1 и PD-L2 в клеточных линиях меланомы человека после воздействия лекарственных форм аранозы-лиофилизата для приготовления раствора для инъекций (араноза-лио) и липосомальной, а также «пустых» липосом, не содержащих аранозы. Материалы и методы. Исследование проводили на 11 клеточных линиях метастатической меланомы человека, 5 из которых несли мутацию BRAF. В количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени исследовали уровень экспрессии генов PD-L1 и PD-L2. В реакции иммунофлуоресценции оценивали экспрессию белков PD-L1 и PD-L2. Результаты. МРНК PD-L1 и PD-L2 экспрессируется на меньшем уровне в клеточных линиях, имеющих мутации BRAF, но различия достоверны только для PD-L2 (p = 0,1373 и p = 0,0207 соответственно). Экспрессия поверхностных белков PD-L1 и PD-L2 в необработанных препаратами клеточных линиях детектируется только на клеточных линиях с диким типом BRAF. В целом, после воздействия липосомальной аранозы уровень экспрессии мРНК PD-L1 и PD-L2 становится значительно ниже (p = 0,0004 и p = 0,0442 соответственно), чем в необработанных линиях. Араноза-лио и «пустые» липосомы в основном привели к увеличению уровня экспрессии PD-L1 (p <0,0001 и p = 0,0005 соответственно) и PD-L2 (p = 0,0005 и p = 0,0025). Но на отдельных линиях наблюдался противоположный эффект. Изменения экспрессии белков PD-L1 и PD-L2 не коррелируют с изменениями уровня экспрессии мРНК. Экспрессия белка PD-L1 после инкубации с липосомальной аранозой повышается по сравнению с необработанными линиями (p = 0,0269), а после воздействия аранозы-лио и «пустых» липосом-уменьшается (p = 0,0663 и p = 0,7213 соответственно). Экспрессия белка PD-L2 после воздействия липосомальной аранозы значимо не меняется (p = 0,1141), а после инкубации с аранозой-лио и «пустыми» липосомами уменьшается (p = 0,0021 и p = 0,008). Выводы. Полученные нами результаты согласуются с данными других исследователей и еще раз подтверждают, что уровень мРНК и белков PD-L1 и PD-L2 изменяется при различных воздействиях. Лекарственные формы аранозы, а также «пустые» липосомы оказывают разное влияние на экспрессию как мРНК, так и белков PD-L1 и PD-L2.

The effects of aranose, cisplatin or paclitaxel in monotherapy and in combination on the expression of Pd–l1 and Pd–l2 in melanoma cells

“…Еще один перспективный метод лечения злокачественных новообразований -иммунотерапия [13][14][15]. PD-1 (белок запрограммированной гибели клеток/ programmed cell death-1) экспрессируется на поверхности активированных Т-лимфоцитов [16,17]. Ассоциация PD-1 с лигандами приводит к инактивации Т-клеток.…”