Transfección de espermatozoides bovinos para su posterior utilización en transgénesis mediada por espermatzoides (SMGT)

Abstract

RESUMENEn bovinos, el progreso de la transgénesis mediada por espermatozoides (SMGT) ha sido lento debido a la ineficiente internalización del ADN exógeno en los espermatozoides. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la transfección de espermatozoides sobre la viabilidad, motilidad espermática y captura de ADN. La transfección se realizó utilizando complejos de ADN plasmidial con Lipofectamina, SuperFect y TurboFect. La viabilidad y captura de ADN se evaluó mediante citometría de flujo y la motilidad mediante el sistema CASA. Los resultados mostraron que todos los espermatozoides transfectados capturan ADN exógeno y que la transfección no afecta la viabilidad espermática. La motilidad sólo se afectó (P<0.01) cuando se utilizó TurboFect. En conclusión, la transfección de espermatozoides utilizando Lipofectamina y SuperFect sería más adecuada para producir embriones transgénicos mediante SMGT vía fecundación in vitro, mientras que TurboFect sería un método más apropiado para producir embriones mediante SMGT vía inyección intracitoplasmática de espermatozoides.Palabras clave: Transfección, transgénesis, espermatozoides ABSTRACT In bovine, the progress of sperm-mediated gene transfer (SMGT) has been slow due to the inefficient internalization of exogenous DNA in the sperm. The objective of this study was to evaluate the effect of transfection of sperm on the viability, sperm motility and DNA capture. Transfection was performed with plasmid DNA complexes using Lipofectamine, SuperFect and TurboFect. The viability and DNA capture was assessed by flow cytometry and the sperm motility through the CASA system. The results showed that all transfection systems allow the capture of exogenous DNA by the sperm and that transfection did not affect the sperm viability. The motility was only affected (P<0.01) with TurboFect. In conclusion, sperm transfection using Lipofectamine and SuperFect would be more appropriate to produce transgenic embryos by SMGT

Aplicación e impacto de la transgénesis animal

“…Esta técnica ha permitido modificar especies como aves de corral, bovinos, ratones, cerdos y peces, con eficiencias entre el 50 al 80 %, obviando los efectos negativos de la micromanipulación embrionaria (Bihon Asfaw & Assefa, 2019). No obstante, se presenta poca absorción de ADN por parte de los espermatozoides, resultando en bajas tasas de fertilización (Arias et al, 2015).…”