Using the PCR Method to Identify the Causative Agents of Infectious Diseases in Cattle Sperm

Yatsenyuk, S.P.; Gorbacheva, N. S.; Yaralova, E. A.; Kozlova, A. D.

doi:10.18551/rjoas.2017-10.47

Cited by 2 publications

(1 citation statement)

References 2 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…Всего проанализировали 410 образцов спермы от быков из отечественных и зарубежных племенных центров (табл.). Предварительно эти образцы были исследованы с использованием тест-системы Мик-Ком («Амплисенс», Россия), предназначенной для выявления ДНК микроорганизмов рода Mycoplasma в биологическом материале (21). Коинфицирование различными видами микоплазм наблюдалось в 121 пробе из отечественных хозяйств (57,3 %) и в 31 пробе из зарубежных племенных центров (15,5 %).…”

unclassified

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ Mycoplasma bovis,Mycoplasma bovigenitalium, Mycoplasma californicum И ВЫЯВЛЕНИЕ Ureaplasma diversum МЕТОДОМПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

Kozlova¹,

Gorbacheva²,

Хаерова³

et al. 2019

s-h. biol.

View full text Add to dashboard Cite

Микоплазмы и уреаплазмы-важные этиологические агенты маститов, пневмоний и репродуктивных нарушений у крупного рогатого скота (КРС), которые наносят значительный экономический ущерб хозяйствам. К наиболее распространенным клинически значимым видам относятся Mycoplasma bovis, M. bovigenitalium, M. californicum и Ureaplasma diversum. Существующие диагностические наборы на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяют с высокой точностью выявлять в биологическом материале бактерии рода Mycoplasma, но не проводить видовую идентификацию. В представленной работе с помощью разработанных методик на основе ПЦР мы впервые выявили и дифференцировали патогенные виды семейства Mycoplasmataceae в образцах криоконсервированной спермы быков-производителей, используемой для искусственного осеменения в отечественных хозяйствах. Нашей целью была разработка методик для идентификации и дифференциации наиболее распространенных патогенных микоплазм (Mycoplasma bovis, M. californicum, M. bovigenitalium) и Ureaplasma diversum на основе ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. В качестве мишеней для ПЦР были выбраны гены UvrC для M. bovis, 16S рРНК для M. bovigenitalium и U. diversum, ген rpoB для M. californicum. В методики включили систему праймеров и зондов для детекции амплификации экзогенного неконкурентного внутреннего контрольного образца (ВКО). Специфичность разработанных методик проверяли на панели образцов, содержащей вирусные и бактериальные патогены, которые вызывают заболевания у крупного рогатого скота, а также геномную ДНК коровы. Для оценки чувствительности каждой методики были разработаны положительные контрольные образцы на основе генно-инженерных конструкций, содержащих участок соответствующей специфической ДНК. Аналитическую чувствительность оценивали отдельно для каждого патогена, для чего исследовали 10-кратные разведения соответствующих контрольных образцов в отрицательных пробах биологического материала (сперма, молоко, влагалищные смывы, внутренние органы). Для разных видов материала аналитическая чувствительность составила в среднем 5½10 3 копий/мл. Эффективность амплификации для M. bovis составила 99 %, для M. bovigenitalium-87 %, для M. californicum-94 %, для U. diversum-98 %. С помощью разработанных методик были исследованы 410 образцов спермы быков для искусственного осеменения из отечественных и зарубежных племенных центров. ДНК M. bovis была обнаружена в 2,5 % образцов из зарубежных племенных центров. В образцах спермы из отечественных хозяйств ДНК M. bovis не выявили. Положительный результат обнаружения ДНК M. bovigenitalium был получен для 60,7 % отечественных и для 25,1 % импортных образцов спермы, ДНК M. californicum обнаружили соответственно в 51,7 % и 25,1 % образцов. ДНК Ureaplasma diversum-в 55 % образцов спермы быков из российских племенных центров и в 12,1 % образцов спермы иностранного происхождения. Коинфицирование M. californicum/M. bovigenitalium выявили в 97 образцах (23,7 %), M. bovigenitalium/U. diversum-в 86 случаях (21 %). Одновременное инфицирование...

show abstract

unclassified

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ Mycoplasma bovis,Mycoplasma bovigenitalium, Mycoplasma californicum И ВЫЯВЛЕНИЕ Ureaplasma diversum МЕТОДОМПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

Kozlova¹,

Gorbacheva²,

Хаерова³

et al. 2019

s-h. biol.

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

Studying the Biological Completeness of Sperm in Semen With Bacterial Contamination

Shmidt,

Iolchiev,

Onkorova

2024

Bulletin of KSAU

View full text Add to dashboard Cite

The aim of the study is to investigate the relationship between bacterial contamination of bull semen and the biological value of spermatozoa, as well as reproductive performance. The object of the study was Holstein bulls (n = 17). The material for the study was frozen-thawed semen of bulls in the amount of 61 samples. Microbiological studies of sperm doses were carried out using standard nutrient media in accordance with GOST 32222-2013. The total number of microorganisms was calculated by the number of grown colony-forming units (CFU/ml) in 1 cm3, with subsequent determination of their morphological pro-perties. Sperm motility and morphology were determined using the Argus CASA program. The state of DNA in spermatozoa was studied by the acridine orange test (AO test) using a fluorescence microscope. The study revealed a high positive correlation (r = +0.940**) between the number of microorganisms in sperm and pathology in individual sperm segments. Analysis of variance confirmed a statistically significant effect of the number of microorganisms on sperm morphology F = 123.2 (p=0.000). The correlation relationship between the fragmentation index and the content of microorganisms has a high value (r = +0.965**). Sperm motility negatively correlates (r = –0.768**) with the number of microorganisms (CFU/ml). In the presence of Mycoplasma spp in the samples, the number of cows with fruitful insemination was 35.5 % due to reduced motility, morphology and high fragmentation of sperm DNA (58 %). Sperm motility in samples containing Mycoplasma spp averages 24.5 %, while in samples without these microorganisms it is 48.9 %. Thus, it can be assumed that the presence of Mycoplasma spp in samples and high bacterial contamination rates lead to to lower reproductive performance in bulls.

show abstract

Using the PCR Method to Identify the Causative Agents of Infectious Diseases in Cattle Sperm

Cited by 2 publications

References 2 publications

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ Mycoplasma bovis,Mycoplasma bovigenitalium, Mycoplasma californicum И ВЫЯВЛЕНИЕ Ureaplasma diversum МЕТОДОМПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ Mycoplasma bovis,Mycoplasma bovigenitalium, Mycoplasma californicum И ВЫЯВЛЕНИЕ Ureaplasma diversum МЕТОДОМПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

Studying the Biological Completeness of Sperm in Semen With Bacterial Contamination

Contact Info

Product

Resources

About