Este estudo apresenta os resultados da diversidade de peixes em um trecho do Rio dos Bois, um manancial de Cerrado, localizado no noroeste do Goiás, Brasil. Sendo um importante tributário das cabeceiras do rio Araguaia, bacia Araguaia-Tocantins, que possui importantes atributos na manutenção da biota deste complexo ecossistema, e parte deste mosaico do Cerrado. A região estudada, compreende a calha principal do Rio dos Bois, da sua cabeceira até a foz do Rio Formiga. As amostragens da ictiofauna foram efetuadas ao longo de duas estações climáticas da região (seca e chuvosa), realizadas em junho/2021 e novembro/2021, respectivamente. As amostragens foram realizadas em 5 pontos amostrais, distribuídos equidistantes de montante à jusante, no Rio dos Bois. Como resultado registrou-se 15.645 espécimes distribuídos em uma riqueza de 46 espécies. Neste estudo, os resultados foram avaliados por testes ecológicos, tais como, frequência de ocorrência, Dominance_D, Simpson_1-D, Shannon_H’, Evenness_e^H/S, Brillouin, Menhinick, Margalef, Equitability_J, Fisher_alpha, Berger-Parker e Chao-1. E analisados pelo teste de normalidade no Tukey test e ANOVA-One way. Sendo possível identificar os locais amostrais mais diversos, assim como os pontos que apresentaram divergência entre alta taxa de captura e baixa diversidade. Indicando que, alguns sítios apresentam maior importância de conservação que outros, vislumbrando futuras ações prioritárias a preservação ambiental.