Validación de cebadores específicos para la detección de los genes env y gag mediante reacción en cadena de la polimerasa anidada en pacientes pediátricos con infección por Virus de Inmunodeficiencia Humana-1 y su confirmación por secuenciación

Abstract

A nivel mundial más de 1.8 millones de niños están infectados con el Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH). La determinación mediante técnicas moleculares de los genes principales del VIH tipo 1 (VIH-1), principal causante de la pandemia del SIDA, aporta información de valor diagnóstico en pacientes pediátricos, primordialmente los nacidos de madres seropositivas. A través de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) anidada, una técnica de biología molecular altamente sensible y específica, la Unidad de Diagnóstico Molecular de la Fundación Jacinto Convit (UDM-FJC) detecta dos de los genes principales del VIH-1: env y gag. La especificidad y eficacia de la PCR anidada depende en gran medida de los cebadores utilizados en la reacción y para ello la validación de estos es necesaria. Esta permite verificar la eficiencia y posible uso de los cebadores para el diagnóstico. La UDM-FJC se propuso validar los cebadores específicos para la detección de env y gag en pacientes pediátricos con sospecha de la enfermedad. Los productos amplificados de los genes fueron secuenciados mediante el método de Sanger y analizados a través de las herramientas bioinformáticas PCR virtual, MultiAlin y BLASTN, observando altos porcentajes de similaridad y cobertura. Adicionalmente, las secuencias obtenidas fueron publicadas en GenBank. Esta validación demuestra que los cebadores empleados en la Unidad son adecuados para el diagnóstico molecular del VIH- 1 en pacientes pediátricos y pueden ser referencia adicional para otros laboratorios, debido a su buena especificidad y eficiencia para detectar los principales genes del virus.