Validación de cebadores específicos para la detección de las variantes p190 y p210 del transcrito de fusión BCR/ ABL1 mediante reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa reversa en pacientes pediátricos con leucemia mieloide crónica y su confirmación por secuenciación

Abstract

La leucemia mieloide crónica (LMC) representa el 2 %-3 % de las leucemias pediátricas, está asociada a una enfermedad más agresiva y tiene como característica la presencia del transcrito de fusión BCR/ABL1. A través de la RT-PCR, una técnica de biología molecular altamente sensible y específica, se detecta la translocación cromosómica más frecuente en pacientes pediátricos con LMC: t(9;22)(q34;q11). La especificidad y eficacia de la RT-PCR depende en gran medida de los cebadores utilizados en la reacción y para ello la validación de estos es necesaria. La misma permite verificar la detección de la secuencia diana, así como la eficiencia y posible uso de los cebadores para el diagnóstico. La Unidad de Diagnóstico Molecular de la Fundación Jacinto Convit (UDM-FJC) se propuso validar cebadores específicos para la detección de la translocación más común en pacientes pediátricos con LMC mediante RT-PCR. Los productos obtenidos de las variantes en estudio fueron secuenciados mediante el método de Sangre y analizados a través de las herramientas bioinformáticas PCR virtual, MultiAlin y BLASTN. Como resultado se obtuvo altos porcentajes de similaridad y cobertura de las variantes e1a2 y b3a2 para BCR/ABL1p190 y BCR/ABL1p210, respectivamente. Adicionalmente las secuencias obtenidas fueron publicadas en GenBank. Esta validación demuestra que los cebadores empleados en la UDM-FJC son adecuados para el diagnóstico molecular en pacientes pediátricos con LMC, debido a que presentan una buena especificidad y eficiencia en la detección del transcrito de fusión más frecuente en este tipo de leucemia.