Validasi Kaedah Kromatografi Cecair Berprestasi Tinggi (HPLC) Jenis Penukar Ion dan Perbandingannya terhadap HPLC Jenis Fasa Berbalik bagi Penentuan Jumlah Homosisteina

Abstract

Kajian ini dijalankan untuk menilai kemampuan kaedah penentuan jumlah homosisteina dalam plasma dengan menggunakan kromatografi cecair berprestasi tinggi jenis penukar ion (HPLC-IEC) dan membandingkan kaedah ini dengan kit komersil yang menggunakan kromatografi cecair berprestasi tinggi jenis fasa berbalik (HPLC-RPC). Validasi kaedah bagi penentuan jumlah homosisteina menggunakan HPLC-IEC telah dilakukan mengikut panduan yang dikeluarkan oleh Jabatan Standard Malaysia. Sebanyak 57 sampel daripada pesakit yang dihantar untuk penentuan jumlah homosisteina telah diuji secara serentak untuk menentukan korelasi antara kedua kaedah tersebut. Hasil kajian ini mendapati bahawa validasi kaedah ini telah memenuhi keperluan ISO MS 15189 dan kelinearan sehingga 500 µM dengan pekali penentuan, r2 ialah 0.999. Kepersisan yang dikaji pada aras normal (10 µM) dan aras berpenyakit/abnormal (60 µM) bagi kebolehulangan adalah masing-masing 3.2% dan 3.8% manakala bagi kebolehasilan semula masing-masing adalah 8.0% dan 8.3%. Had pengesanan dan had pengiraan yang diperoleh adalah 0.9274 dan 3.0912 µM. Keputusan ketepatan bagi kembalian semula adalah 92% dan bias adalah -8.6%. Perbandingan kaedah yang telah divalidasi dengan kit komersil menunjukkan hubungan korelasi yang kuat antara kedua-dua kaedah ini (y = 0.721x + 4.034; r = 0.978; p<0.05). Oleh yang demikian, kaedah penentuan jumlah homosisteina menggunakan HPLC-IEC menunjukkan kepersisan yang memuaskan dan korelasi yang kuat setara dengan kit komersil yang dianalisis menggunakan HPLC-RPC. Kaedah ini lebih menjimatkan kos reagen dan mampu menganalisis lebih banyak sampel jika dibandingkan dengan kit komersil. Ini sekaligus dapat membantu dalam diagnosis bagi penyakit kepincangan metabolisme terwaris (IEM) terutama dalam metabolisme homosisteina dengan tepat.

A Label-Free Molecularly Imprinted Electrochemical Sensor Based on MXene Nanosheets Modified by Gold Nanoparticles for Sensitive and Selective Detection of Homocysteine

“…2,3 Thus, the detection of Hcy has attracted a lot of attention in areas such as drug research, medical diagnosis and disease surveillance. To date, common methods for the determination of Hcy include gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS), 4,5 high-performance liquid chromatography (HPLC), 6,7 capillary electrophoresis (CE) 8,9 and Fluorescence polarization immunoassay (FPIA). 10 Although these methods can offer good results, for the Hcy to provide more accurate and authoritative supporting information for the current diagnosis of clinically relevant diseases, it is necessary to overcome limitations of above methods (such as complex operation, expensive instrumentation and complicated pretreatment) and develop more rapid and convenient methods for the determination of Hcy with lower detection limits.…”