Μελέτη Της Επίδρασης Πολυμορφισμών Και Της Έκφρασης Γονιδίων Στις Αναπαραγωγικές Παραμέτρους Των Χοιρινών

Abstract

Σκοπός της παρούσας διδακτορικής διατριβής ήταν η μελέτη της αναπαραγωγής των χοίρων και η εν δυνάμει βελτίωση της παραγωγικότητας τους, όσων αφορά τη βελτίωση των αναπαραγωγικών χαρακτηριστικών των χοιρομητέρων με σκοπό την αύξηση των παραγόμενων χοιριδίων και την προστασία του αναπαραγωγικού συστήματος των αρσενικών και θηλυκών χοίρων από διάφορες ασθένειες. Η δομή της παρούσας διδακτορικής διατριβής χωρίζεται σε δύο Μέρη. To ΜΕΡΟΣ Α περιλαμβάνει τη μελέτη της έκφρασης γονιδίων σε διάφορα αναπαραγωγικά όργανα των χοίρων, σε σειρές κυττάρων και σε έμβρυα χοίρων παραγόμενα in vitro. Πραγματοποιήθηκε προσδιορισμός της έκφρασης των γονιδίων της οικογένειας TLR και της οικογένειας των β-defensins. Μελετήθηκε το πρότυπο έκφρασης τους στην ωοθήκη, τον ωαγωγό, τον όρχι και την επιδιδυμίδα των χοίρων, στα κοκκώδη κύτταρα που περιβάλλουν το ωάριο καθώς επίσης και σε έμβρυα χοίρων παραγόμενα in vitro. Επίσης έγινε προσδιορισμός της επίδρασης της επώασης με LPS στα επίπεδα έκφρασης των παραπάνω γονιδίων στα κοκκώδη κύτταρα για διαφορετικά χρονικά διαστήματα (0, 6, 12 και 24 ώρες) παρουσία ή μη του συστατικού LPS (Lipopolysaccharide). Το ΜΕΡΟΣ Β περιλαμβάνει τον προσδιορισμό των πολυμορφισμών γονιδίων που σχετίζονται με την αναπαραγωγή και την πιθανή τους σχέση με παραγωγικά χαρακτηριστικά των χοιρομητέρων που εκτρέφονται στην ελληνική επικράτεια. Η τεχνική που εφαρμόστηκε για την διερεύνηση των συγκεκριμένων πολυμορφισμών (SNPs) ονομάζεται PCR – RFLP (Polymerase Chain Reaction – Restriction Fragment Length Polymorphism). Συνολικά επιλέχθηκαν τρία γονίδια που σχετίζονται με αναπαραγωγικά χαρακτηριστικά σε χοιρομητέρες (γονίδιο BF, γονίδιο RBP4 και γονίδιο ESR2) τα οποία μελετήθηκαν σε 420 χοιρομητέρες που προέρχονταν από τρεις εμπορικές χοιροτροφικές μονάδες της Ελλάδας. Οι 400 προέρχονταν από μεγάλες εμπορικές μονάδες και ήταν διασταυρώσεις των φυλών Landrace/Large White ενώ τα αρσενικά Duroc/Pietrain/Landrace/Large White σε διάφορες αναλογίες. Στην πρώτη μονάδα έγινε εξαγωγή DNA σε 120 χοιρομητέρες και σε 8 αρσενικούς χοίρους ενώ στη δεύτερη μονάδα σε 280 χοιρομητέρες και σε 8 αρσενικούς χοίρους. 20 χοιρομητέρες προέρχονταν από μια εκτατική μονάδα χοίρων (ελληνικής αυτόχθονης φυλής, μαύρα ή διασταυρώσεις τους με αγριόχοιρους των ορεινών περιοχών της Μακεδονίας). Τα παραγωγικά χαρακτηριστικά που συσχετίστηκαν με τους πολυμορφισμούς των γονιδίων αφορούν το μέγεθος της τοκετομάδας και τον Αριθμό Απογαλακτισθέντων χοιριδίων.