Μελέτη Του Ρόλου Των Φωσφοϊνοσιτιδίων Στο Μηχανισμό Της Φαγοκύτωσης

Abstract

Ενδοκυτταρική κυκλοφορία μεμβρανών 1.2 Φαγοκύτωση 1.2.1 ˝Επαγγελματίες˝ φαγοκύτταρα Κοκκιοκύτταρα Μονοκύτταρα Λεμφοκύτταρα Μη ˝επαγγελματίες˝ φαγοκύτταρα 1.2.2 Ο μηχανισμός της φαγοκύτωσης-Εισαγωγή 1.2.3 Φαγοκύτωση μέσω υποδοχέων στα μακροφάγα Συμμετοχή της PLD στη φαγοκύτωση Συμμετοχή της PLA 2 στη φαγοκύτωση Συμμετοχή των GTPασών στη φαγοκύτωση 1.2.4 Στάδια της φαγοκύτωσης 1.2.4.1 Υποδοχείς που ενεργοποιούν τη φαγοκύτωση Υποδοχείς FcγR Υποδοχείς CR Υποδοχείς MR Υποδοχείς TLR 1.2.4.2 Ανακατατάξεις του κυτοσκελετού της ακτίνης Πολυμερισμός της ακτίνης 1.2.4.3 Ωρίμανση φαγοσώματος-Σχηματισμός φαγολυσοσώματος 1.2.4.4 Πρωτεομική ανάλυση φαγοσωμάτων 1.2.5 Φαγοκύτωση βακτηρίων Mycobacterium tuberculosis Legionella pneumophila Salmonella enterica Listeria monocytogenes 1.2.6 Φαγοκύτωση αποπτωτικών κυττάρων 2. ΦΩΣΦΟΪΝΟΣΙΤΙΔΙΑ ΚΑΙ ΦΑΓΟΚΥΤΩΣΗ 2.1 Δομή των φωσφοϊνοσιτιδίων 2.2 Μεταβολισμός των φωσφοϊνοσιτιδίων-Εισαγωγή Υποτομείς πρωτεϊνών που συνδέονται με φωσφοϊνοσιτίδια v 2.3. Ένζυμα που συμμετέχουν στο μεταβολισμό των φωσφοϊνοσιτιδίων 2.3.1 3-κινάσες των φωσφοϊνοσιτιδίων ΡΙ3Κ Ι ΡΙ3Κ ΙΙ ΡΙ3Κ ΙΙΙ 2.3.2 4-κινάσες των φωσφοϊνοσιτιδίων 2.3.3 5-κινάσες των φωσφοϊνοσιτιδίων 2.3.4 Φωσφατάσες των φωσφοϊνοσιτιδίων 3-φωσφατάσες 4-φωσφατάσες 5-φωσφατάσες 1-φωσφατάση 2.3.5 Φωσφολιπάσες-Φωσφολιπάση C PLA ΡΙ-PLC 2.4 Λειτουργίες στις οποίες συμμετέχουν φωσφοϊνοσιτίδια 2.5 Συμμετοχή των φωσφοϊνοσιτιδίων στο μηχανισμό της φαγοκύτωσης 3. Η ΦΑΓΟΚΥΤΩΣΗ ΣΤΟΥΣ ΜΟΝΟΚΥΤΤΑΡΟΥΣ ΕΥΚΑΡΥΩΤΙΚΟΥΣ ΟΡΓΑΝΙΣΜΟΥΣ 3.1 Φαγοκύτωση στο Dictyostelium discoideum 3.2 Φαγοκύτωση στο μονοκύτταρο βλεφαριδωτό οργανισμό Paramecium 3.3 Η φαγοκύτωση στο μονοκύτταρο οργανισμό Tetrahymena 3.3.1 Συνθήκες ανάπτυξης της Tetrahymena 3.3.2 Μορφολογία 3.3.3 Φυσιολογία ενδοκυτταρικής κυκλοφορίας μεμβρανών Έκκριση λυσοσωμικών ενζύμων Ρυθμιζόμενη εξωκύτωση βλεννοκυστών 3.3.4 Μεταλλάξεις και μεταλλαγμένα ως προς την κυκλοφορία μεμβρανών στελέχη Tetrahymena 3.3.5 Φαγοκύτωση 3.3.6 Φωσφοϊνοσιτίδια και ρόλος τους στην Tetrahymena 4. ΣΚΟΠΟΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ Β. ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΟ ΜΕΡΟΣ 5. ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ 5.1 Καλλιέργειες Τetrahymena thermophila αγρίου τύπου και μεταλλαγμένων στελεχών 5.2 Παρασκευή και απομόνωση σωματιδίων δεξτράνης-σιδήρου vi 5.3 Μελέτη φαγοκύτωσης 5.3.1 Δοκιμασία φαγοκύτωσης σε κύτταρα Τ.thermophila CU438.1 με μαύρη σινική μελάνη και σωματίδια δεξτράνης-σιδήρου 5.3.2 Παρακολούθηση πορείας φαγοκύτωσης και μελέτη μεταλλαγμένων χαρακτηριστικών στελεχών Τ.thermophila Α2 και SB281 5.4 Επίδραση αναστολέων wt, LY294002 και U73122 στη φαγοκύτωση 5.5 Απομόνωση φαγοσωμάτων από καλλιέργειες Τ.thermophila CU438.1 και SB281 5.5.1 Απομόνωση φαγοσωμάτων συγκεκριμένης ηλικίας 5.5.2 Απομόνωση φαγοσωμάτων συγκεκριμένων σταδίων ωρίμανσης (πειράματα σήμανσης-εκδίωξης) 5.6 Έλεγχος μεταλλαγμένων χαρακτηριστικών στελεχών Τ.thermophila Α2 και SB281 5.6.1 Έλεγχος του μεταλλαγμένου, ως προς τη φαγοκύτωση, στελέχους T.thermophila A2 5.6.2 Έλεγχος του μεταλλαγμένου, ως προς το σχηματισμό βλεννοκυστών, στελέχους T.thermophila SB281 5.7 Ιn vivo επισήμανση καλλιεργειών Τ.thermophila vii ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 6. ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ...