Μελέτη των μονοπατιών των μικρών μορίων RNA στο μεταξοσκώληκα (Bombyx mori)

Abstract

Η παρούσα Διδακτορική Διατριβή εστιάζει στη μελέτη των μονοπατιών των μικρών μορίων RNA στο μεταξοσκώληκα Bombyx mori, υπό το πρίσμα των παραγόντων που επηρεάζουν την αποδοτικότητα του RNAi μηχανισμού. Οι παράγοντες που εξετάστηκαν αφορούσαν κυρίως στην έκφραση γονιδίων-κλειδιών του RNAi μηχανισμού και στην ύπαρξη ιϊκής μόλυνσης (εμμένουσας ή παθογόνου), ενώ ακόμα έγιναν αναφορές στους μηχανισμούς της ενδογενούς φυσικής ανοσίας και της ικανότητας πρόσληψης dsRNA από το εξωκυττάριο μέσο. Από την ανάλυση των αποτελεσμάτων προέκυψαν σημαντικά συμπεράσματα σχετικά με την επίδραση των προαναφερθέντων παραγόντων στην αποδοτικότητα του μηχανισμού του RNAi στο μεταξοσκώληκα. Τα ευρήματά μας αποκαλύπτουν πιθανή αλληλοεπικάλυψη των βασικών μονοπατιών του RNAi στο μεταξοσκώληκα in vitro, κατά την πρόκληση γονιδιακής αποσιώπησης μέσω dsRNA (miRNA, siRNA και piRNA), ή μέσω φουρκέτας RNA (siRNA και piRNA). Επιπλέον, πέραν της εμπλοκής τους στο μηχανισμό γονιδιακής αποσιώπησης μέσω dsRNA, τα γονίδια BmDcr2 και BmAgo2 του μονοπατιού siRNA αναδεικνύονται ως καίριοι παράγοντες για το μεσέντερο του μεταξοσκώληκα, τόσο υπό φυσιολογικές συνθήκες, όσο και υπό συνθήκες ιϊκής μόλυνσης (BmCPV). Όμως, και το γονίδιο BmAgo3 του piRNA μονοπατιού φαίνεται να συνιστά σημαντικό παράγοντα που επηρεάζει την αποδοτικότητα του RNAi μηχανισμού στο μεταξοσκώληκα, ενώ μπορεί επίσης μαζί με τους παράγοντες BmR2D2 και BmTranslin2, και ενδεχομένως και τον BmAub, να διαδραματίσει κρίσιμο ρόλο για την αντιϊκή απόκριση (BmMLV και AcMNPV) στα Λεπιδόπτερα. Ακόμη, η παρουσία μίας εμμένουσας μόλυνσης δε φαίνεται να επιδρά αρνητικά στην αποδοτικότητα του RNAi μηχανισμού (BmMLV) και στην αντιϊκή προστασία του μεταξοσκώληκα (BmCPV). Τέλος, τα κλασσικά μονοπάτια της ενδογενούς φυσικής ανοσίας του B. mori δεν αποκρίνονται έντονα κατά τη διάρκεια της αντιϊκής προστασίας (BmCPV), και κατά συνέπεια δε φαίνεται να αλληλεπιδρούν σημαντικά με τον RNAi μηχανισμό, ούτως ώστε να επηρεάζουν την αποδοτικότητά του. Ωστόσο, από την παρούσα έρευνα αναδεικνύονται νέα γονίδια που ενδεχομένως διαθέτουν στρατηγικής σημασίας ρόλους για την αντιϊκή απόκριση του μεταξοσκώληκα σε συνδυασμό με τη δράση του RNAi μηχανισμού.