Изучение Развития Партеногенетических Эмбрионов Bos Taurus:определение Оптимальной Концентрации Фактора Ингибирования Лейкемии При Созревании Ооцитов in Vitro

Abstract

Лейкемию ингибирующий фактор (LIF) является цитокином, который играет важную роль в созревании ооцитов млекопитающих. Цель исследования - изучение влияния разной концентрации LIF in vitro на ядерное созревание ооцитов и способность их к эмбриональному развитию после партеногенетической активации. Выделенные post mortem ооцит-кумулюсные комплексы (ОКК) культивировали в среде созревания в отсутствие (контроль) или в присутствии различных концентраций (10, 20, 40, 80 и 160 нг/мл) LIF. Через 22 ч созревшие ооциты (ооциты с первым полярным тельцем) искусственно активировали и культивировали для оценки компетенции к эмбриональному развитию. На 2-е сутки после активации оценивали дробление, на 7-е сутки определяли число эмбрионов, развившихся до стадии бластоцисты. Полученные 7-дневные эмбрионы также фиксировали и окрашивали DAPI для оценки локализации ядер. Не выявлено влияния условий культивирования на завершение ядерного созревания. Не выявлено существенных межгрупповых различий при варьировании доли созревших ооцитов в интервале 75-91%. Также отсутствовали различия между вариантами в уровне дробления ооцитов после партеногенетической активации. В то же время, условия созревания ооцитов влияли на их развитие до стадии бластоцисты, без изменения качества последних. Созревание ОКК в присутствие 20 нг/мл LIF повышало выход бластоцист от 21,7±1,5 в контроле до 29,1±3,4% (P<0,05). Снижение концентрации LIF (до 10 нг/мл) не влияло на выход бластоцист, а увеличение до 40, 80 и 160 нг/мл приводило к равно негативному эффекту, который по отношению к контролю имел характер тенденции, а при сравнении с концентрацией 20 нг/мл проявлял статистически значимый эффект (P<0,05- 0,01). Таким образом, LIF в среде созревания оказывает дозо-зависимое стимулирующее действие на способность ооцитов коров к последующему эмбриональному развитию in vitro. Заключили, что оптимальной концентрацией LIF в среде для получения партеногенетических эмбрионов является 20 нг/мл. Leukemia inhibitory factor (LIF) is a cytokine that plays an important role in the maturation of mammalian oocytes. The aim of the study was to study the effect of different concentrations of LIF in vitro on nuclear maturation of oocytes and their ability for embryonic development after parthenogenetic activation. Post mortem isolated cumulus-oocyte complexes (COCs) were cultured in maturation medium in the absence (control) or presence of different concentrations (10, 20, 40, 80, and 160 ng/ml) of LIF. After 22 h, mature oocytes (oocytes with the first polar body) were artificially activated and cultured to assess the competence for embryonic development. On the 2nd day after activation, cleavage was assessed, and on the 7th day, the number of embryos that developed to the blastocyst stage was determined. The resulting 7-day embryos were also fixed and stained with DAPI to assess nuclear localization. No effect of culture conditions on the completion of nuclear maturation was found. No significant intergroup differences were found when the proportion of mature oocytes varied in the range of 75-91%. There were also no differences between the variants in the level of oocyte cleavage after parthenogenetic activation. At the same time, the conditions of oocyte maturation affected their development to the blastocyst stage, without changing the quality of the latter. Maturation of COCs in presence of 20 ng/ml LIF increased the yield of blastocysts from 21.7±1.5 in the control to 29.1±3.4% (P<0.05). A decrease in the LIF concentration (to 10 ng/ml) did not affect the yield of blastocysts, and an increase to 40, 80 and 160 ng/ml led to an equally negative effect, which in relation to the control had a tendency character, and when compared with a concentration of 20 ng/ml showed a statistically significant effect (P<0.05-0.01). Thus, LIF in the maturation medium has a dose-dependent stimulating effect on the ability of bovine oocytes to undergo subsequent embryonic development in vitro. Concluded that the optimal concentration of LIF in IVM medium for obtaining parthenogenetic embryos is 20 ng/ml.