Характеристика изменений парамагнитных центров микробной клетки под действием рибонуклеазыBacillus pumilus

Abstract

Поступила в редакцию 06.06.2013 г. Перспектива использования цитотоксичной рибонуклеазы Bacillus pumilus (биназы), индуцирую щей избирательную гибель опухолевых клеток, обусловливает интерес к ее биологическим эффек там в отношении нормальной микрофлоры человека. С помощью проточной цитометрии установ лено, что биназа в концентрации, вызывающей апоптоз раковых клеток, не влияет на жизнеспособ ность Escherichia coli K12. Впервые методом ЭПР спектроскопии зарегистрированы изменения парамагнитных центров клеток E. coli K12 под действием биназы в нетоксичных концентрациях: по вышение интенсивности ЭПР сигналов, характерных для железосодержащих белков, в том числе, Fe-S кластеров, усиление интенсивности спектра сверхтонкой структуры двухвалентного марганца. С применением спинового зонда ТМТН (N (1 гидрокси 2,2,6,6 тетраметилпипередин 4 ил) 2 ме тилпропанамид гидрохлорида) зафиксировано двукратное повышение уровня активных форм кисло рода (АФК) в клетках, провоцирующее окислительный стресс у бактерий, обработанных ферментом. Методом масс спектрометрии с индуктивно связанной плазмой продемонстрировано увеличение содержания в клетках щелочных (Li, Na, K), щелочноземельных (Mg, Ca), переходных (Cr, Mn, Fe, Cu, Zn) и постпереходных (Bi, Pb) металлов. Особого внимания заслуживают данные по возрастанию со держания Cu и Zn, нарушающих функции ферментов дыхательной цепи, и Mn, известного как кофак тор супероксид дисмутазы, подтверждающие развитие окислительного стресса у бактерий.