No abstract

Detection of anti-Toxoplasma gondii antibodies in experimentally and naturally infected non-human primates by Indirect Fluorescence Assay (IFA) and indirect ELISA Detecção de anticorpos anti-Toxoplasma gondii por meio das técnicas de Imunofluorescência Indireta e ELISA Indireto em primatas experimentalmente e naturalmente infectados

Hepatozoon species are the most common intracellular hemoparasite found in reptiles. Hepatozoon caimani, whose vectors are Culex mosquitoes, has been detected in a high prevalence among caimans in Brazil by blood smears examinations. The present work aimed to detect and characterize the Hepatozoon spp. found in 33 caimans (24 free-ranging and 9 captive; 28 males and 5 females) (Caiman crocodilus yacare) sampled at Poconé, North Pantanal, state of Mato Grosso, Brazil, using blood smears examinations and molecular techniques. Hepatozoon spp.-gametocytes were found in 70.8% (17/24) and 88.8% (8/9) of blood smears from free-ranging and captive caimans, respectively. Hepatozoon spp. 18S rRNA DNA was found in 79.2% (19/24) and 88.8% (8/9) of free-ranging and captive caimans, respectively. Comparative analysis of parasitized and non-parasitized erythrocytes showed that all analyzed features were significantly different (P<0.05) for both linear and area dimensions. Phylogenetic analysis based on 18S rRNA sequences grouped the Hepatozoon spp. sequences detected in the present study together with H. caimani, recently detected in caimans in southern Pantanal.Keywords: Caimans, Hepatozoon caimani, morphology, morphometry, molecular characterisation, Brazil. ResumoEspécies do gênero Hepatozoon são os hemoparasitas intracelulares mais comumente encontrados em répteis. Hepatozoon caimani, cujos vetores são mosquitos do gênero Culex sp., têm sido detectados em uma alta prevalência entre jacarés no Brasil, por meio da análise de esfregaços sanguíneos. O presente estudo objetivou detectar e caracterizar parasitas do gênero Hepatozoon spp. em 33 jacarés (24 de vida-livre e 9 de cativeiro; 28 machos e 5 fêmeas) (Caiman crocodilus yacare) amostrados em Poconé, região norte do Pantanal, estado do Mato Grosso, Brasil, por meio da análise de esfregaços sanguíneos e técnicas moleculares. Gametócitos de Hepatozoon spp. foram encontrados em 70,8% (17/24) e em 88,8% (8/9) dos esfregaços sanguíneos de jacarés de via-livre e cativeiro, respectivamente. 18S rRNA DNA de Hepatozoon spp. foi detectado em 79,2% (19/24) e 88,8% (8/9) das amostras de sangue de jacarés de vida-livre e cativeiro, respectivamente. A análise comparativa de eritrócitos parasitados e não parasitados mostrou diferença significativa (P<0,05) em todas as variáveis lineares e de área analisadas. A análise filogenética baseada em sequências de DNA do 18S rRNA agrupou as sequências de Hepatozoon spp. detectadas no presente estudo juntamente com aquelas de H. caimani, recentemente detectadas em jacarés do Pantanal do Mato Grosso do Sul.

The Indirect Fluorescence Assay (IFA) and the indirect ELISA were comparatively used to detect IgG and IgM antibodies for Toxoplasma gondii in experimentally and naturally infected primates. In the experimentally infected group, antibodies of diagnostic value were detected at day 9 post-infection (PI) with the IFA (IgG and IgM) and with IgG-ELISA. IgM-ELISA detected antibodies for T. gondii starting at day 3 PI until the end of the experiment (102 days PI). Of the 209 naturally infected sera tested, from many zoos of State of Sao Paulo, 64.59 and 67.94% were positive in the IgG-IFA test and IgG-ELISA respectively. IgM-ELISA test detected seropositivity in 52.63% of the sera although IgM-IFA test detected it in only in 0.96% of the samples. The differential toxoplasmosis diagnosis was accomplished with Neospora caninum by IFA, observing 61 (29.2%) seropositive animals for this parasite and 149 (70.8%) negative. Sixty animals were positive for both T. gondii and N. caninum. Pneumonia, splenomegaly, and intestinal ulcers were macroscopically observed. Unremarkable interstitial pneumonia, enteritis, colitis, splenitis, and glomerulitis were microscopically observed. The immunohistochemical stain could not detect the presence of T. gondii in the tissues of the animals infected experimentally.Keywords: Toxoplasma gondii, toxoplasmosis, primates, Indirect Fluorescence Assay, ELISA. ResumoDetectou-se anticorpos das classes IgG e IgM anti-Toxoplasma gondii em primatas experimentalmente e naturalmente infectados, utilizando-se como técnicas comparativas a RIFI e o ELISA-teste. No grupo dos primatas experimentalmente infectados, anticorpos de valor diagnóstico foram detectados a partir do 9º dia de infecção tanto na RIFI (IgG e IgM) como no ELISA-IgG. O ELISA IgM detectou anticorpos a partir do 3º dia de infecção até o final do experimento (102 dias pós-infecção). Dos 209 soros dos primatas naturalmente infectados, de diversos zoológicos do Estado de São Paulo, 64,59 e 67,94% mostraram-se positivos na RIFI-IgG e no ELISA-IgG, respectivamente. O ELISA-IgM detectou soropositividade em 52,63% dos soros ao passo que a RIFI-IgM detectou apenas 0,96%. Foi realizado também diagnóstico diferencial para Neospora caninum, através da RIFI, observando-se 61 (29,2%) animais soropositivos para este parasita e 149 (70,8%) animais negativos. Sessenta animais foram positivos para T. gondii e N. caninum. Pneumonia, esplenomegalia e úlceras intestinais foram observadas macroscopicamente. Pneumonia intersticial, enterite, colite, esplenite e glomerulite foram os achados microscópicos. A imunoistoquímica não revelou a presença do T. gondii nos tecidos dos animais experimentalmente infectados.