No abstract

Экспериментальная модель антиген-и коллагениндуцированного артрита у мышей 1 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 630099, г. Новосибирск, Российская Федерация 2 Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 630559, г. Кольцово, Российская Федерация Резюме Введение. Ревматоидный артрит (РА) -одно из наиболее распространенных аутоиммунных заболеваний со сложным патогенезом. Для разработки и апробации новых методов и подходов в терапии РА (биологических препаратов, клеточных технологий) необходима экспериментальная модель со схожими патогенетическими реакциями и иммунологическими изменениями. Одним из таких подходов является разработка моделей комбинированного антиген-и коллаген-индуцированного артрита.Цель исследования -обосновать применение в исследовательской деятельности и в разработке новых терапевтических подходов модели антиген-и коллаген-индуцированного артрита (АИА/КИА) на основании изучения иммунологических и гистологических показателей, выявленных в данной модели.Материал и методы. Индукция экспериментального АИА/КИА проводилась по трем разным протоколам у 60 мышей линии Balb/c. Визуальную оценку артрита проводили, измеряя припухлость лап штангенциркулем в разные сроки. Оценка иммунологических изменений включала анализ содержания антител к коллагену II типа методом иммуноферментного анализа, содержания Т-регуляторных клеток методом проточной цитометрии. Кроме того, проводилось гистологическое исследование тканей суставов с последующим анализом полученных данных.Результаты. На 10-е сутки регистрировали достоверное увеличение толщины лап у животных при индукции экспериментального артрита по 3 разным протоколам. Интенсивность припухлости спадала к 23-м суткам. Достоверное увеличенное содержание антител к коллагену II типа наблюдалось во всех экспериментальных группах, но в группе животных с использованием протокола № 1 количество антител к коллагену II типа было достоверно выше. Высокий уровень Т-регуляторных клеток зарегистрирован на 10-е сутки только в группе мышей с использованием протокола № 1. Гистологические изменения в виде гиперплазии синовиальной оболочки, паннусов, узураций в разной степени наблюдались во всех экспериментальных группах, но наиболее выраженные изменения были в группе животных с применением протокола № 1.Заключение. У всех экспериментальных животных независимо от использованного протокола индукции артрита наблюдались изменения, наиболее приближенные к РА, при их сравнении с классическими моделями индукции экспериментального артрита. Основываясь на том, что в группе животных с использованием протокола № 1 выявляется увеличение содержания Т-регуляторных клеток, уровни антител к коллагену II типа стабильно находились на высоком уровне, а гистологические изменения были наиболее выраж...

Allorecognition is known to involve a large number of lymphocytes carrying diverse T-cell receptor repertoire. Thus, one way to understand allorecognition and rejection mechanisms is via high-throughput sequencing of T-cell receptors. In this study, in order to explore and systematize the properties of the alloreactive T-cell receptor repertoire, we modeled direct and indirect allorecognition pathways using material from inbred mice in vitro and in vivo. Decoding of the obtained T-cell receptor genes using high-throughput sequencing revealed some features of the alloreactive repertoires. Thus, alloreactive T-cell receptor repertoires were characterized by specific V-gene usage patterns, changes in CDR3 loop length, and some amino acid occurrence probabilities in the CDR3 loop. Particularly pronounced changes were observed for directly alloreactive clonotypes. We also revealed a clustering of directly and indirectly alloreactive clonotypes by their ability to bind a single antigen; amino acid patterns of the CDR3 loop of alloreactive clonotypes; and the presence in alloreactive repertoires of clonotypes also associated with infectious, autoimmune, and tumor diseases. The obtained results were determined by the modeling of the simplified allorecognition reaction in inbred mice in which stimulation was performed with a single MHCII molecule. We suppose that the decomposition of the diverse alloreactive TCR repertoire observed in humans with transplants into such simple reactions will help to find alloreactive repertoire features; e.g., a dominant clonotype or V-gene usage pattern, which may be targeted to correct the entire rejection reaction in patients. In this work, we propose several technical ways for such decomposition analysis, including separate modeling of the indirect alloreaction pathway and clustering of alloreactive clonotypes according to their ability to bind a single antigen, among others.

Получение и характеристика стабильных антиген-специфических Т-регуляторных клеток с помощью блокаторов циклин-зависимых киназФедеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 630099, г. Новосибирск, Российская Федерация Резюме Введение. В иммунной системе регуляторные CD4 + CD25 high FoxP3 + -T-клетки (Трег) являются важными участниками индукции толерантности. Трег подавляют воспалительные реакции различной этиологии, включая аутоиммунные и трансплантационные. Используя заложенный регуляторный потенциал Трег, индуцированных in vitro, можно добиться подавления воспалительных реакций на конкретный антиген, не затрагивая иммунный ответ в целом.Цель исследования -получение антиген-специфичных FoxP3 + -Трег, обладающих иммуносупрессивными свойствами, в смешанной культуре лимфоцитов.Материал и методы. В исследовании использовали самцов мышей линий C57BL/6 и Balb/c. Полученные дендритные клетки от мышей линии C57BL/6 и CD4 + -спленоциты от мышей линии Balb/c сокультивировали для получения антиген-специфических CD4 + -Т-клеток. Далее CD4 + -Т-клетки культивировали с добавлением AS2863619, ТФРβ и ИЛ-2 для трансдифференцировки антиген-специфических эффекторных Т-лимфоцитов в антиген-специфические CD4 + CD25 high FoxP3 + -Трег. Фенотип полученных Трег оценивали с помощью проточной цитофлуориметрии. Оценку толерогенного потенциала Трег проводили с помощью смешанной культуры лимфоцитов.Результаты. Показано, что совместное использование анти-CD3 и AS2863619 приводит к 10-кратному увеличению относительного количества CD25 high FoxP3 + -Трег в культуре CD4 + -Т-лимфоцитов по сравнению с нестимулированными лимфоцитами. Анализ с помощью проточной цитометрии показал, что в культуре антиген-специфичных Трег (Аг-Трег) преобладает популяция эффекторных Т-клеток памяти. При этом в культуре не Аг-Трег резидентные Т-клетки памяти составляли лишь около половины субпопуляции. В смешанной культуре лимфоцитов было выявлено, что в присутствии не Аг-Трег в 2,5 раза увеличивается пролиферация CD4 + -Т-лимфоцитов Balb/c в ответ на добавление антигена C57Bl/6. Однако в присутствии Аг-Трег даже при добавлении антигенов C57Bl/6 уровень пролиферации CD4 + -Т-лимфоцитов Balb/c не отличается от контрольной группы.Заключение. Применение AS2863619 при культивировании антиген-специфичных CD4 + -лимфоцитов усиливает генерацию Аг-Трег. При этом получаемые Аг-Трег обладают фенотипическими свойствами эффекторных регуляторных Т-клеток памяти и функционально подавляют пролиферацию CD4 + -лимфоцитов на антигены, что делает целесообразным изучение их способности к индукции иммунологической толерантности и подавлению иммунного ответа.

Получение дендритных клеток мышей in vitro с помощью Flt3-L и их характеристика 1 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 630099, г. Новосибирск, Российская Федерация 2 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 630091, г. Новосибирск, Российская Федерация 3 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Новосибирский национальный исследовательский государственный университет» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 630090, г. Новосибирск, Российская Федерация Резюме Введение. В настоящее время для модуляции адаптивного иммунного ответа с целью коррекции тех или иных заболеваний человека активно разрабатываются клеточные вакцины на основе миелоидных дендритных клеток (мДК). Однако об эффективности применения плазмацитоидных дендритных клеток (пДК) в тех же целях все еще мало данных.Цель исследования -разработка протокола получения пДК мышей с помощью рекомбинантного Flt3-L in vitro и описание фенотипических и функциональных свойств полученных дендритных клеток (ДК) для решения вопроса о возможности их использования при создании клеточных вакцин.Материал и методы. ДК получали путем культивирования клеток костного мозга мышей в присутствии Flt3-L. Относительное количество и фенотип ДК оценивали с помощью проточной цитофлуориметрии, а морфологию ДК -с помощью флуоресцентной микроскопии. Функциональные свойства ДК изучали по их способности индуцировать Трег-клетки и пролиферацию CD4 + -лимфоцитов в смешанной культуре лимфоцитов. Экспрессию рецептора хемотаксиса ССR9 на ДК оценивали с помощью проточной цитофлуориметрии.Результаты. Показано, что c помощью Flt3-L из клеток костного мозга мышей возможно in vitro получение культур ДК с относительно высоким содержанием B220 + CD11c + -пДК и Sirpα + CD11c + -мДК. B220 + CD11c + -пДК и Sirpα + CD11c + -мДК в полученных культурах отличались морфологией и степенью зрелости. В смешанной культуре лимфоцитов полученные in vitro ДК, обладали свойствами незрелых ДК, что проявлялось в их способности генерировать повышенное количество Трег и вызывать сниженную пролиферацию CD4 + -лимфоцитов. При стимуляции полученных ДК с помощью CpG ДНК наблюдалось их созревание, и снижение способности к индукции Трег и увеличение способности к индукции пролиферации CD4 + -лимфоцитов, т. е. приобретение иммуногенной функции. Относительно небольшое количество B220 + CD11c + -пДК и Sirpα + CD11c + -мДК несли на поверхности рецептор хемотаксиса CCR9, однако количество B220 + CD11c + -пДК и Sirpα + CD11c + -мДК, несущих CCR9 внутриклеточно, стремилось к 100 %.Заключение. Таким образом, с помощью Flt3-L из клеток костного мозга мышей возможно in vitro получение культур B220 + CD11c + -пДК и Sirpα + CD11c + -мДК, пригодных к применению при р...