RESUMOObjetivo: verificar a contaminação microbiológica de frascos de álcool gel utilizados para higienização das mãos em uma unidade de cuidados intensivos pediátricos (UCIP), segundo o local do frasco e o tempo de permanência no leito. Método: Estudo exploratório e análise microbiológica de 140 amostras provenientes da tampa, bico e conteúdo interno de frascos de álcool gel instalados nos leitos de uma UCIP de um hospital universitário de São Paulo. A coleta de dados ocorreu entre maio e junho de 2013, após a aprovação pelo Comitê de Ética e Pesquisa (parecer 0440/11). Resultados: dentre as culturas realizadas, 54(38,6%) evidenciaram crescimento bacteriano, com predominância na tampa em todos os tempos de coleta. Foram identificadas espécies de Staphylococcus coagulase negativa, Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii. Conclusão: frascos de álcool gel podem se tornar colonizados durante utilização em unidades de internação, devendo receber atenção especial quanto ao processo de limpeza. Palavras-chave: Higiene das mãos; segurança do paciente; unidades de terapia intensiva pediátrica; enfermagem pediátrica. ABSTRACTObjective: to ascertain microbiological contamination of alcohol gel bottles used for hand hygiene in a pediatric intensive care unit (PICU), by bottle location and time installed in bed. Method: exploratory study and microbiological analysis of 140 samples from lid, spout and internal content of alcohol gel bottles installed on PICU beds at a university hospital in São Paulo. Data was collected from May to June 2013, after approval by the Research Ethics Committee (No. 0440/11). Results: of the cultures, 54 (38.6%) showed bacterial growth, predominantly on the lid at all sampling times. The species identified were Staphylococcus coagulase-negative, Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii. Conclusion: alcohol gel bottles can become colonized during use in inpatient units and should receive special attention as regards the cleaning process.