As low-level laser therapy immune cells responses are not always clarified, this study aimed to evaluate cytokines and immune cells profile after low-level laser therapy (LLLT) on arthritis-induced model. Arthritis was induced in C57BL/6 mice divided into five groups: euthanized 5 hours after inflammation induction; untreated; dexamethasone treated; LLLT at 3 Jcm ; LLLT at 30 Jcm . Cytokine measurements by enzyme-linked immunosorbent assay and mRNA cytokine relative levels by real-time quantitative polymerase chain reaction were performed with arthritic ankle (IL-1β, IL-6, TNF-α, IL-10 and TGF-β). Macrophages, dendritic cells, natural killer cells, lymphocytes CD4 , CD8 , Treg and costimulatory proteins were quantified in proximal lymph node by flow cytometry. Data showed decrease in all cytokine levels after LLLT and alteration in mRNA relative levels, depending on the energy density used. LLLT was able to increase of immune cell populations analyzed in the lymph node as well as costimulatory proteins expression on macrophages and dendritic cells. Treg TCD4 and TCD8 population enrichment was observed in LLLT at 3 and 30 Jcm groups, respectively. Furthermore, Treg TCD8 cells expressing higher levels of CD25 were observed at LLLT at 30 Jcm group. Our results indicate that LLLT could change the inflammatory course of arthritis, tending to accelerate its resolution through immune cells photobiostimulation.
A terapia fotodinâmica (TFD) é uma alternativa de tratamento para o câncer de mama, demonstrando seletividade e importante citotoxicidade aos tecidos malignos. Este tipo de terapia envolve o uso de dois componentes não tóxicos: uma substância fotossensibilizante e uma fonte de luz (como lasers de baixa potência). Em combinação, eles podem induzir efeitos celulares e teciduais por meio de processos dependentes de oxigênio, levando as células tumorais à morte por necrose, apoptose e autofagia. Assim, o objetivo foi avaliar a atividade antitumoral da terapia fotodinâmica utilizando células tumorais mamárias em modelos experimentais in vitro. A linhagem celular de tumor de mama 4T1 foi cultivada em meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB) e 1% de antibiótico a 37°C e 5% de CO2. O azul de metileno (AM) foi dissolvido em meio RPMI nas concentrações 5, 10, 15, 20, 25, 50, 100 e 150 µM, filtrado e as células foram incubadas durante 30 min a 37°C. Logo após esse período de incubação, a solução de AM foi removida, as placas lavadas eu um novo meio RPMI adicionado. A irradiação foi realizada com laser vermelho de baixa potência (660nm - AsGaAl), perpendicularmente e pontualmente, nos seguintes parâmetros: potência 100mW, densidade de energia 100 Jcm-2 , energia por ponto 2,8 J, modo de emissão de luz contínua e tempo de exposição 28s. Após a irradiação, viabilidade celular foi testada através de MTT, a migração celular foi realizada pelo método wound healing e níveis relativos de mRNA através de real time PCR. Os resultados de viabilidade celular indicam que as concentrações de AM de 5 a 50 µM não foram tóxicas para as células 4T1, enquanto as concentrações de 100 e 150 µM apresentaram citotoxicidade. Por outro lado, células 4T1 incubadas com AM e irradiadas com laser de baixa potência apresentaram redução da viabilidade e na migração celular na concentração de 50 µM. Níveis relativos de mRNA para caspase-6 não foram alterados nos tratamentos testados; já os níveis para Bcl-2 foram reduzidos após TFD 25 µM. Em conclusão, concentrações superiores a 100 µM de AM no tempo de incubação de 30 min geram efeitos citotóxicos nas células, reduzindo a viabilidade. Concentração de 50 µM demonstrou diminuição na viabilidade e migração celular após a TFD, indicando uma boa dose-resposta do tratamento para esse tipo de célula.
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