Objetivo: Descrever a atividade antimicrobiana de Aspidosperma nitidum. Métodos: O extrato (EE) foi submetido à partição ácido-base obtendo-se as frações de alcaloides (FA) e de neutros (FN). Para verificar a atividade antimicrobiana, inicialmente realizou-se screening pelo teste de disco difusão em ágar frente às cepas de Sthaphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae e Proteus mirabilis. Para as amostras que apresentaram halo de inibição no teste de disco difusão em ágar, foi realizada a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) pelo teste de microdiluição utilizando o MTT. Resultados: No teste de difusão em ágar, o EE, FA, FN inibiram o crescimento de bactérias S. aureus e E. coli. Não houve inibição do crescimento para as outras cepas. Na determinação da CIM, o EE, FA e FN apresentaram CIM de 1000 µg/mL para E. coli. Frente à cepa de S. aureus, o EE apresentou CIM de 250 µg/mL, sendo considerado moderadamente ativo, já as frações FA e FN foram considerados de fraca atividade, pois apresentaram CIM de 500 µg/mL. Conclusão: A maior atividade antimicrobiana do extrato frente a S. aureus pode estar relacionada com alcaloides β-carbolínicos, ou com um possível sinergismo entre esta classe de alcaloides e alcaloides indólicos.