No abstract

insulin is the major product formed during mild acid hydrolysis of bovine insulin at low insulin concentration. The derivative was isolated by standard procedures and its purity established by isoelectric focusing, disc electrophoresis and electrophoresis on cellulose acetate strips. The identity of the acid-transformed derivative was determined as [A21-desamidojinsulin by the action of carboxypeptidase A, using conditions under which a C-terminal aspartic acid residue would not be removed. The biological activity of this crystalline derivative was found to be 15.9 units/mg as measured by the mouse convulsion assay. Kristallines [A21-Desamido]RinderinsulmZusammenfassung: [A21 -DesamidoJRinderinsulin entsteht als Hauptprodukt bei milder saurer Hydrolyse von Rinderinsulin bei niedrigen Insulinkonzentrationen. Das Derivat wurde mit Standardniethoden isoliert und seine Reinheit mittels isoelektrischer Fokussierung, Diskelektrophorese und Elektrophorese auf Celluloseacetat-Streifen nachgewiesen. Für den Nachweis, daß es sich bei dem säuretransformierten Derivat um [A21-Desamido]-insulin handelt, wurde Carboxypeptidase A verwendet, unter Bedingungen, bei denen ein C-terminaler Asparaginsäurerest nicht entfernt wird. Der Mäusekrampftest ergab für das kristalline Derivat eine biologische Aktivität von 15.9 Insulin-Einh./mg.

The reaction of bovine insulin with the hydrophilic reagent l-fluoro-2-nitro-4-trimethylammoniobenzene iodide at pH 8.2 has been reexamined. From the mixture of products a crystalline derivative substituted at the Gly A1 terminus has been isolated. It has been characterized by amino acid analysis, end group analysis, cellulose acetate electrophoresis and sulphitolysis. The derivative has a biological activity (mouse convulsion assay) of 60% relative to insulin. Darstellung von kristallinem Al-(2-Nitro-4-trimethylammoniophenyl)-RinderinsulinZusammenfassung: Rinderinsulin wurde mit l-Fluor-2-nitro-4-trimethylammoniobenzol-jodid umgesetzt; als Hauptprodukt wurde ein kristallines Derivat isoliert, das ein amN-terminalen Glycin der -Kette substituiertes Insulin darstellt. Die biologische Aktivität im Mauskrampftest beträgt 60% verglichen mit Insulin.

0-{2-Nitro-4-trimethylammoniophenyl)-Tyr A 14 ] insulin (bovine) is a product formed on reaction of bovine insulin with the hydrophilic reagent l-fluoro-2-nitro4-trimethylammoniobenzene iodide (T N-F) in an aqueous buffer at pH 8.00. The derivative was isolated and its purity established by standard procedures. The identity of the derivative was determined by degrative studies with α-chymotrypsin. The addition of zinc to the above reaction decreases the yield of the title derivative, but increases the yield of the [7V a -TAN-Gly A1 ] derivative.[A ra -Boc-Gly A1 ]insulin was also reacted with the above mentioned reagent in an attempt to improve the yield of the A14-tyrosine derivative. The biological activity of this microcrystalline derivative was found to be 12.4 units/mg as measured by the mouse convulsion assay. Ein kristallisiertes AI4-(2-Nitro-4-trimethylammoniophenyl)-Derivat des RinderinsulinsZusammenfassung: Bei der Reaktion von Rinderinsulin mit dem hydrophilen Reagens l-Fluor-2-nitro-4-trimethylammoniobenzol-iodid in w rigem Puffer bei pH 8.00 wird der Hydroxylwasserstoff des Tyrosinrestes in Position 14 der A-Kette durch den 2-Nitro-4-trimethylammoniophenylRest (TAN) substituiert. Das Derivat wurde isoliert und seine Reinheit durch Standard-Verfahren belegt. Seine Struktur wurde durch Abbauuntersuchungen mit α-Chymotrypsin bestimmt. Zusatz von Zink zur oben erw hnten Reaktion vermindert die Ausbeute des in A14 substituierten Produkts, beg nstigt aber die Substitution amTVterminalen Glycinrest der A-Kette. Um die Ausbeute des in A14 substituierten Produkts zu erh hen, setzen wir auch in AI mit t-Butyloxycarbonyl substituiertes Rinderinsulin mit dem genannten Reagens um. Die biologische Aktivit t des mikrokristallinen Derivates war 12.4 Einheiten/mg, gemessen mit dem M usefall test.

No abstract