El interés creciente por el cultivo de pitahaya ha permitido la propagación de esquejes de diferentes variedades promoviendo su comercialización a nivel nacional e internacional, requiriéndose asegurar la calidad fitosanitaria y la propagación masiva en menor tiempo de dicho cultivo. Por ello, en el presente estudio, a través de la técnica de cultivo in vitro, se evaluó el efecto de cuatro concentraciones del regulador de crecimiento BAP (Bencilaminopurina) y un control sobre la etapa de establecimiento in vitro en explantes provenientes de areolas de Hylocereus guatemalensis, comúnmente conocido como American Beauty. Se empleó un total de 60 unidades muestrales evaluados por un periodo de tres meses. El mayor porcentaje de brotación se obtuvo en un periodo mínimo de 30 días con una concentración de 0.5 mg/l de BAP, así mismo, en cuanto a la longitud de cladodios, dicha concentración permitió obtener la mayor longitud con una media de 22.92 mm, estableciéndose diferencias significativas con los demás tratamientos empleados. El mayor número de areolas por cladodio se obtuvo con los tratamientos 0.5 mg/l y 1 mg/l de BAP, respectivamente. Tras superar con éxito la etapa de establecimiento, la presente investigación permitirá continuar con los estudios relacionados a la micropropagación vegetal del cultivo.