Resumen: Introducción: las guías de práctica clínica (GPC) optimizan la atención médica basada en la mejor evidencia disponible. En Colombia, existen más de 60 GPC basadas en la evidencia desde 2013. Dichas herramientas han sido promovidas por entes nacionales e internacionales. Sin embargo, la información publicada a partir de una muestra de múltiples prestadores de servicios de salud (PSS) sobre el uso en la práctica de estas herramientas es limitada. Objetivo: identificar factores que los PSS asocian al conocimiento, barreras y uso de las GPC elaboradas por el Gobierno de Colombia a partir del 2013. Métodos: estudio transversal con muestreo aleatorio simple con reemplazo por departamentos colombianos que envió encuestas a los PSS por correo electrónico durante 2019. Se utilizaron modelos multivariado para identificar factores asociados al conocimiento, barreras y uso de las GPC. Resultados: El 91% de las respuestas provenientes de los PSS refirió conocer las GPC y el 85% las ha usado alguna vez. Además, el 89% percibió barreras al momento de usar las GPC. Si identificó que los PSS privados, personal joven y quienes realizan tareas administrativas tienen más probabilidad a acceder a las GPC. Así mismo, los PSS de baja complejidad, personal joven y administrativo son quienes reportaron mayor uso de las GPC. Por último, el personal clínico fue quien reportó mayores desafíos para usar las guías. Conclusiones: El conocimiento y uso de GPC es alto entre los PSS; no obstante, la presencia de barreras al momento de usarlas constituye una oportunidad de mejora en la implementación y adherencia a las GPC en los PSS. Objetivo: identificar factores que los PSS asocian al conocimiento, barreras y uso de las GPC elaboradas por el Gobierno de Colombia a partir del 2013. Métodos: estudio transversal con muestreo aleatorio simple con reemplazo por departamentos colombianos que envió encuestas a PSS por correo electrónico entre noviembre y diciembre de 2019. Se utilizaron modelos multivariado para identificar los factores asociados al conocimiento, barreras y uso de las GPC. Resultados: El 91% de las respuestas provenientes de PSS refirió conocer las GPC y el 85% las ha usado alguna vez. Sin embargo, el 89% percibió barreras al momento de usar las GPC. Las respuestas de PSS privados tenían menor probabilidad de usar las GPC. Conclusiones: El conocimiento y uso de GPC es alto entre los PSS, no obstante, la presencia de barreras al momento de usarlas constituye una oportunidad de mejora en la implementación y adherencia a las GPC en los PSS.