No abstract

Περίληψη -Σκοπός……………………………………………………………………10 Εισαγωγή……………………………………………………………………………….12 1. Γενικά χαρακτηριστικά και κλινικά συμπτώματα της HD……………………….12 2. Νευροεκφυλιστικές ασθένειες με επεκτάσεις αλληλουχιών και ειδικότερα τριπλετών……………………………………………………………………………19 3. Οι επαναλήψεις CAG στο ανθρώπινο γονιδίωμα (γενικά) και σε άλλους οργανισμούς………………………………………………………………………...27 4. Επέκταση της CAG επανάληψης στη HD για τους ευρωπαϊκούς πληθυσμούς ..….31 5. Συσχέτιση επανάληψης με την ηλικία έναρξης της νόσου……………………….32 5.1 Σχέση αυξημένων επαναλήψεων με τον HD φαινότυπο και τον χρόνο έναρξης της ασθένειας…………………………………………………………………..33 5.1.1 Νεανικές περιπτώσεις…………………………………………….36 5.1.2 Late-onset περιπτώσεις…………………………………………...37 5.1.3 Σποραδικές περιπτώσεις………………………………………….39 6. Έκφραση του HD γονιδίου…..…………………………………………………...43 6.1 Προσδιορισμός και τοπολογία του HD mRNA ……………………………44 6.2 Προσδιορισμός και τοπολογία της HD πρωτεΐνης………………………….47 7. Παθογένεια πρωτεΐνης………………………………………………………………53 7.1 Η Huntingtin και η συνεργασία της με άλλες πρωτεΐνες…………………..60 7.1.1 Αλληλεπίδραση της huntingtin με την GADPH………………….60 7.1.2 Αλληλεπίδραση της huntingtin με την HAP……………………...62 7.1.3 Αλληλεπίδραση της huntingtin με την CAM …………………….64 7.1.4 Αλληλεπίδραση της huntingtin με την HIP ……………………....65 7.2 Συσχέτιση νευρικού θανάτου με μιτοχόνδρια……………………………...67 8. Επέκταση της τριπλέτας (CAG)n στην HD………………………………………69 8.1 Υποθέσεις για τον σχηματισμό της επέκτασης (μηχανισμοί)………………70 8.2 Υποθέσεις για το μπλοκάρισμα της αντιγραφής …………………………...74 8.3 Τροποποιητικοί παράγοντες………………………………………………..76 8.4 Μηχανισμοί μετάλλαξης (γειτονικές αλληλουχίες) 5'-end περιοχή και cisacting modifiers…………………………………………………………….76 9. Mοριακή ανάλυση της γενετικής θέση της ΗD. Ανάπτυξη χαρτών σε σχέση με πολυμορφικούς δείκτες…………………………………………………………...80 10. Ομολογίες στο γονίδιο της HD μεταξύ ανθρώπου και άλλων οργανισμών…..….84 11. Διαγονιδιακά μοντέλα ζώων για την HD…………………………………………89 12. Linkage analysis -Γενετική σύνδεση…………………………………………….92 12.1 Χαρτογράφηση γονιδίων ασθενειών με ανάλυση γενετικής σύνδεσης…...93 12.2 Πλεονεκτήματα των DNA δεικτών ……………………………………….94 12.3 Χρήση των SNPs στη ανάλυση του γονιδιώματος………………………...95 12.4 Περιγραφή πολυμορφικών δεικτών (STRs και SNPs) που χρησιμοποιήθηκαν στην παρούσα μελέτη………………………………………………98 Υλικά και μέθοδοι……………………………………………………………………..99 1. Κλινικές μελέτες………………………………………………………………..99 2. Βιολογικό υλικό………………………………………………………………...99 3. Επιλογή πολυμορφικών δεικτών………………………………………………101 4. Απομόνωση DNA……………………………………………………………..102 4.1 Προετοιμασία λευκοκυττάρων από περιφερικό αίμα…………………….…………………………………………………..102 4.2 Εξαγωγή DNA από λευκοκύτταρα……………………………………...…103 4.3 Παρασκευή διαλυμάτων…………………………………………………...104 5. Ποσοτικοποίηση του DNA…………………………………………………….105 5.1 Με τη βοήθεια του σπεκτροφωτόμετρου …………………………………106 5.2 Με τη βοήθεια πηκτώματος αγαρόζης…………………………………….107 6. Αναπαραγωγή τμημάτων DNA με τη μέθοδο της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) -Polymerase Chain Reaction……………………...