Lacases são óxido-redutases com ampla especificidade de ação podendo oxidar diferentes substratos, incluindo diferentes grupos de xenobióticos, como corantes, herbicidas, fármacos e pesticidas. O potencial redox padrão das lacases geralmente não é grande o suficiente para oxidar vários compostos xenobióticos, porém sua ação oxidativa pode ser melhorada com a utilização de mediadores. Estes são pequenas moléculas facilmente oxidáveis que podem atuar como intermediários redox entre o sítio ativo da enzima e o substrato que a enzima sozinha é incapaz de oxidar. O verde malaquita (VM) é um corante trifenilmetano utilizado como fungicida que é altamente tóxico para células de mamíferos. A degradação do VM por diferentes lacases de fungos ligninolíticos têm sido relatada. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram, primeiro, cultivar Pleurotus ostreatus, Pleurotus pulmonarius e Trametes versicolor para produzir lacases. Segundo, estudar o potencial de biorremediação do VM por essas lacases na ausência e presença de três diferentes mediadores: acetilacetona, ácido violúrico e hidróxi-benzotriazol (HBT). Para obtenção das lacases, os fungos foram cultivados em estado sólido utilizando resíduo da pupunheira como substrato. Após 6 dias de cultivo, as lacases foram extraídas com água, filtradas em gaze e centrifugadas a 1800g por 15 min. Os sobrenadantes límpidos foram considerados como extratos brutos de lacase. Para avaliar a ação das lacases na degradação do VM, as enzimas foram adicionadas a soluções contendo 100 ppm do VM e as misturas foram incubadas a 40 ºC por até 24 h. Periodicamente a absorbância da solução foi avaliada em espectrofotômetro a 620 nm. Os melhores resultados foram obtidos utilizando-se ácido violúrico como mediador. Os testes de toxicidade foram realizados com sementes de alface (Lactuca sativa). Após 5 dias, avaliou-se o crescimento das radículas na presença do corante sem tratamento e com o corante pós tratamento com lacase de T. versicolor ou com lacase de T. versicolor + ácido violúrico. As análises com sementes de alface mostraram uma redução significativa da fitoxicidade do VM após os dois tratamentos, mas o ácido violúrico apresentou por si só discreta fitotoxicidade. Palavras-Chave: biodegradação, corantes industriais, oxidases, fungos ligninolíticos, lacases.