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Summary: High performance liquid chiomatography (HPLC) was used to monitor the purity of the Substrates and to establish the patterns of hydrolysis of ortho-andpanz-nitrophenylmaltooligosaccharides (2-7 glucose residues) catalysed by human pancreatic and salivary -amylase. Separation of the reaction products from the remaining Substrate was performed on a TSK-G-2000 PW or a RP18 column. By measuring the quantitative distribution of products, and assuming a 5-subsite model for the active site of -amylase, differential activities for the hydrolysis of the different glycosidic bonds in the 2 series of Substrates were deduced. A highly sensitive coupled continüous assay System is based on the formation of phenyloligosaccharides with 1-4 glucose residues by the action of the amylase unter test, coupled to hydrolysis of these products by yeast -glucpsidase. The most suitable test Substrates were shown to be pflra-nitrophenyl-a-/^maltotetraoside and -pentaoside. Direct production of nitrophenol from ortho-nitiophenyl-oi-Z)-maltotrioside is recommended for the measurement of the -amylase activity of pancreatic and salivary gland secretions and extracts. Wirkungsmuster von menschlicher Pankreas· und Speichelamylase bei der Hydrolyse von l ,4-OL-D-Nitrophenylmaltooligosacchariden l y 4-OL-D-Nitrophenylmaltooligosaccharideals Substrate der OL-Amylase, LZusammenfassung: Es wurde die Methode der Hochpräzisionschromatographie (HPLC) zur Kontrolle der Reinheit der Substrate sowie zur Ermittlung der Spaltungsmuster menschlicher Pankreas^ und Speichelamylase angewendet. Als Substrate wurden 2-und 4-Nitrophenylmaltooligosaccharide mit 2-7 Glucoseresten benutzt. Die Trennung der Reaktionsprodukte von dem restlichen Substrat erfolgte unter Verwendung von TSK-G-2000 PW oder RP 18-Säulen. Aufgrund der quantitativen Produktverteilung einerseits und einem 5-Ünterbindungsstellen-Modell des aktiven Zentrums der -Amylase andererseits, konnten differenzierte Aktivitäten für die Hydrolyse der verschiedenen Glucosidbimdungen in den beiden genannten Serien von Substraten bestimmt werden. Auf Basis der katalytischen Aktivität von Hefe-a-Glucosidase für die Hydrolyse von Nitrophenyloligosacchariden mit 1-4 Glucoseresten und der Geschwindigkeit von deren Bildung durch -Amylase aus den ursprünglichen Substraten werden 4-Nitrophenyl-a-Z)-maltotetraosid und -pentaosid als am besten geeignete Substrate für ein hochempfindliches gekoppeltes kontinuierliches Testsystem empfohlen. Die direkte Bildung von Nitrophenol aus 2-Nitrophenyl-a-£>-maltotriosid wird für die kontinuierliche Messung der Amyläseaktivität von Pankreas-und Speicheldrüsensekreten und -extrakten empfohJen.

Using the powerful lachrymator (2-chlorobenzylidene)malononitrile as electron acceptor, two types of NAD(P)H dehydrogenases have been isolated from human blood. Crystallisation of the homogenous enzymes was performed in 50% polyethylene glycol solution.The enzymes (average molecular weight 18000) are composed of only one polypeptide chain and have a very similar amino acid composition.B-side stereospecificity was determined with respect to the cofactor by gas chromatographymass spectrometry for the reductase. Besides (2-chlorobenzylidene)malononitrile, 2,6-dichloroindophenol, methylene blue, 4-benzoquinone, FMN and FAD are also reduced using NADH or NADPH as hydrogen donor with the rates decreasing in the given order. Reduction of methemoglobin is observed only upon addition of methylene blue, FMN or FAD as carriers. (2-Chlorobenzylidene)malononitrile reduction is inhibited by most of the compounds known to be decouplers of oxidative phosphorylation. Benzylidenmalononitril-Derivate ah Substrate und Inhibitoren einer neuen NAD(P)H-Dehydrogenase aus Erythrozyten: Reinigung und Kristallisation von zwei EnzymformenZusammenfassung: Zwei Typen von NAD(P)HDehydrogenasen konnten bei Verwendung des starken Tränenerregers (2-Chlorbenzyliden)-malononitril als Elektronen-Acceptor aus menschlichem Blut isoliert werden. Die homogenen Enzyme wurden aus SOproz. Polyethylenglycol-Lö-sung kristallisiert.Die Enzyme (mittleres Molekulargewicht 18000) haben nur eine Polypeptidkette; ihre Aminosäu-renzusammensetzung ist sehr ähnlich. Die Reduktase hat bezüglich des Cofaktors B-Seiten-Stereospezifität, wie mit Hilfe der Gaschromatographie-Massenspektrometrie bestimmt wurde. Außer (2-Chlorbenzyliden)malononitril