-The present study used an RT-nested-PCR and an immunohistochemistry assay to detect bovine respiratory syncytial virus in tissues from experimentally infected balb/c mice. As a first step, Chicken Embryo Related (CER) cell monolayers infected with the BRSV-25-BR strain isolated in Brazil were used for antigen production. Then, the infected lung and tracheal tissues of female balb/c mice were collected on 3, 5, 7 and 10 days post-infection and submitted to both techniques. Primers specific to F and G genes that amplify fragments of 481 bp and 371 bp, respectively, were used. The BRSV detection was not successful in all of the animals tested. The

Bovine respiratory syncytial viruses virus (BRSV) is one of the etiologic agents of pneumonia in young cattle. Few studies have been made aiming detection of the virus in samples collected from adult animals, especially those asymptomatic bovines. However, it is assumed that infections in these groups may occur mostly asymptomatic and this would be an important mechanism for maintaining of BRSV in herds. In this study, the goal was to conduct an analysis of the occurrence of asymptomatic infections by BRSV in lung samples (n=68) and nasal swabs (209) taken from adult animals collected in abattoirs from Southern and Southeastern Brazil respectively, to detect via polymerase chain reaction the occurrence of infected animals in populations of adult cattle. The samples that resulted positive (6) on RT-PCR were subsequently subjected to cutting with restriction enzymes and sequencing for genetic characterization (2 samples). All samples belongs to subgroup B of BRSV, which is reported as the one circulating in Brazil. The results obtained demonstrate that BRSV may be present in samples taken from adult animals, which is in agreement the hypothesis that infections in adults run in a sub-clinical way that may be of importance as a maintenance mechanism of the virus in bovine herds. RESUMO.-O vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) é um dos agentes etiológicos de pneumonias em bovinos jovens. Poucos estudos foram realizados visando à detecção do agente em amostras coletadas de animais adultos, e em especial de bovinos assintomáticos. No entanto, presume--se que as infecções ocorridas nestes grupos possam ocorrer em sua maioria de forma assintomática e este seria um mecanismo importante para manutenção do BRSV nos rebanhos. No presente estudo, o objetivo foi realizar uma análise da prevalência de infecções assintomáticas pelo BRSV em pulmões (n=68) e swabs nasais (209) coletados de bovinos adultos coletadas em frigoríϐicos da região Sul e Sudeste respectivamente, no sentido de detectar por intermédio de reação da polimerase em cadeia qual a taxa de animais infectados em populações de animais adultos onde não ocorram sinais clínicos da infecção. As amostras positivas à RT-PCR (6) foram posteriormente submetidas ao corte com enzimas de restrição (REA) e sequenciamento para caracterização genética do gene F (2 das amostras). Todas as amostras se enquadram no subgrupo B de BRSV, o grupo circulante no Brasil conforme estudos anteriores. Os resultados obtidos demonstram que o BRSV pode estar presente em amostras obtidas de animais sadios, reforçando a hipótese de que infecções subclínicas

O vírus da cinomose canina (CDV), um Morbillivirus da família Paramyxoviridae, é o agente etiológico de doença neurológica e sistêmica em cães. O diagnóstico laboratorial da infecção requer o isolamento viral ou detecção do material genético do vírus em secreções ou tecidos de cães com suspeita clínica da doença. A diversidade genética entre os isolados de CDV pode ser aferida pelo sequenciamento efilogenia molecular do gene que codifica a hemaglutinina viral (gene H), havendo atualmente um especial interesse em comparar as amostras circulantes a campo com o genogrupo América-1, que abrange as cepas presentes nas vacinas disponíveis no mercado. No presente estudo, foi realizada a detecção molecular do gene H de CDV a partir de amostras biológicas colhidas ante- e post- -mortem de 15 cães com sinais clínicos sugestivos de cinomose na região metropolitana de Campinas, São Paulo. Dez dos 15 cães analisados tiveram ao menos um órgão positivo na detecção molecular e os amplicons obtidos foram submetidos ao sequenciamento nucleotídico seguido de análise filogenética molecular. De forma semelhante ao que já foi reportado para estudo analisando a diversidade do gene H em outros países, a reconstrução filogenética obtida para as amostras de casos de cinomose da região de Campinas demonstrou as mesmas foram agrupadas junto a amostras norte-americanas, europeias e japonesas recentes, em um grupo genético distinto do grupo de amostras clássicas de CDV, nomeado America-1, o qual engloba as estirpes vacinais Snyder Hill, Onderstepoort e Lederle.

-A dot-ELISA test for the detection of anti-BRSV antibodies is described. The objective of this study was the standardisation of a test as a fast, inexpensive and effective alternative to detect anti-BRSV antibodies. Its sensitivity, specificity and usefulness were compared to a commercial ELISA-kit and to the standard serum neutralisation (SN) test. The standardisation of the technique was done using nitrocellulose disks soaked with a viral sample isolated in Brazil, BRSV-25-BR. The best results were obtained when the disks were sensitised with a purified antigen at a concentration of 0.7 µg/disk and the bovine serum was diluted 1: 200. The experiment used 423 samples of bovine serum collected in the main cattle breeding centres in Brazil.

Assinatura iv "Não há fim, não há começo, o que existe é uma infinita paixão pela vida". (Federico Fellini) v Aos meus queridos pais, Nei e Diana, dedico este trabalho. vi Agradecimentos À Profa. Dra. Clarice Weis Arns, pela orientação, crédito e apoio durante toda a elaboração desta tese e pela oportunidade e confiança em mim depositadas. À FAPESP, pelo imprescindível auxílio financeiro prestado, incluindo a concessão de uma bolsa de doutorado para execução deste trabalho. À Profa. Dra. Maria Silvia Viccari Gatti, pelas valiosas sugestões oferecidas, paciência e amizade mesmo nos momentos em que outros assuntos importantes consumiam seu tempo e energia. Ao Prof. Dr. Lars Erik Larsen, do Instituto Dinamarquês de Veterinária (DFVF), por permitir que parte deste experimento fosse realizado sob sua supervisão, em que sua experiência, conselhos, grande receptividade e imensa paciência foram indispensáveis para a finalização deste estudo. Agradeço ainda pela valiosa ajuda prestada mesmo a distância e pela amizade que se formou após esse período. vii A todos os professores do Departamento de Microbiologia e Imunologia, IB da UNICAMP que, por sua amizade e ensinamentos, contribuíram para a realização desta tese.Aos meus pais, que souberam incentivar, valorizar e respeitar meu propósito de concluir esta dissertação, além do apoio "MÃEnutenção" e da "FAPAI".À minha amada irmã Manoela e querido cunhado Marco, pelo estímulo, amor, carinho, amizade, convivência, enfim por tudo que sempre fizeram por mim e principalmente por meus sobrinhos lindos. Aos meus sobrinhos, Isabela "Peti" coração e Gabriel "Titi" bibico, por existirem e serem mais um motivo de alegria em minha vida. À minha irmã Cláudia, pelo amor, incentivo e amizade.Ao meu herói e amado avô, José Antônio, e minha estimada avó Dinah, in memorian, pelo carinho, companhia e por sempre acreditarem em mim: amo vocês. Vô, rumo aos 100! À minha querida Didi, que sempre foi minha mãe, pai, confidente, amiga, enfim, acho que não existe uma única palavra para descrever o que ela significa para mim.À supersecretária Caroline, que em nenhum momento me deixou desamparada e sempre esteve pronta para resolver qualquer problema. viii Aos meus "pustipais", Paulo e Cláudia, e às minhas "pusti-irmãs", Mariana e Stefânia, pelo amor, carinho, amizade, compartilhando momentos alegres e tristes, sendo minha família aqui em Campinas, ou seja, tendo assumido o real sentido desta palavra.Ao meu "irmão dinamarquês" e grande amigo Ivan, por todo o carinho, importantes correções, apoio, estímulo, amizade, mesmo após minha estadia na Dinamarca, e se tornando parte de minha família.À família Martins, Marco e Virgínia, pelo carinho e pelos agradáveis momentos de convívio.À minha grande amiga Lelê que, desde que nos conhecemos, esteve ali "para o que der e vier", sempre com muito bom humor e alto astral e sendo, com muito orgulho, mais uma integrante da família Domingues.Aos amigos da Negosvaldo, JB, Celso, Sazima, Áurea, César e Gustavinho, pela grande amizade, momentos de muita alegria e descon...