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RESUMO -O presente estudo teve como objetivo a seleção de microorganismos, utilizando diferentes fontes de carbono como alternativas para a produção de biossurfactantes, e aplicações em processos de descontaminação ambiental. Os cultivos foram realizados em meio mineral suplementado, com 2,0% da fonte de carbono (glicose, sacarose, melaço de cana e óleo residual de fritura) durante 96 horas, a 200 rpm à 28 ºC. Inicialmente, uma triagem foi realizada para seleção da melhor bactéria produtora de biossurfactante. Após essa etapa, foi analisada a melhor condição de produção, onde o tensoativo microbiano foi submetido a testes de emulsão em diferentes compostos hidrofóbicos e aplicado como agente dispersante de petróleo na água. Como resultado, o Bacillus cereus destacou-se como o melhor produtor de biossurfactante cultivado em meio suplementado com sacarose e melaço de cana a 28 ºC, apresentando uma redução na tensão superficial de 27,50 mN/m e 28,50 mN/ m, respectivamente. O biossurfactante apresentou emulsificação acima de 90% no óleo residual de motor e dispersão de 40% do óleo na água, demonstrando potencial de aplicação na biorremediação.