El objetivo fue establecer un protocolo para la desinfección y el establecimiento de microesquejes de café Coffea arabica Var. Caturra Rojo provenientes de campo, como etapa previa para la multiplicación in vitro. El diseño utilizado fue el diseño en bloques completos al azar (DBCA), los tratamientos para desinfección fueron t1, t2 y t3; mientras que, en la fase de establecimiento fueron t1, t2, t3, t4 y t5. Se encontró que el protocolo de desinfección que mejor funcionó fue t3 que utilizó benomilo y gentamicina por 10 minutos, luego el uso de hipoclorito de sodio, lejía, a 1,3 % por 30 minutos, en base a que favoreció una mayor sobrevivencia y menor fenolización de los explantes. El mejor medio de establecimiento fue el t5 que tuvo como ingredientes MS más BAP a 0,5 mg l-1.