Objetivo: Avaliar a produção de EROs em células de câncer de mama submetidas ao tratamento com metformina, in vitro. Métodos: Realizado estudo caso-controle, através do cultivo da linhagem de células de câncer de mama MDA-MB-231, da análise da viabilidade das células após o tratamento com metformina, e comparação dos níveis de expressão gênica relacionada às proteínas Superóxido Dismutase, Catalase e Heme Oxigenase em células de câncer e controle após o tratamento com metformina. Resultados: A partir da análise de variância com um fator (one-way ANOVA), constatou-se que há comparação estatisticamente significativa entre o grupo controle e as concentrações 1,25mM, 10mM e 20mM, sendo essas concentrações utilizadas nos ensaios para análise da expressão de enzimas antioxidantes. Os resultados da qPCR demonstraram que não houve alteração significativa nos níveis de expressão gênica destas enzimas em relação ao controle. Conclusão: Os estudos que investigam a relação entre a metformina e o estresse oxidativo em linhagens de células carcinogênicas mamárias ainda são escassos, apontando a necessidade em ampliar o desenvolvimento de pesquisas que investigam essa relação.

O câncer é considerado o mal do século, segundo a OMS, sendo o de mama o maisletal entre as mulheres. Diferenças metabólicas, em comparação com as células saudáveis,favorecem o desenvolvimento e a sobrevivência das células cancerígenas. Neste contexto,para o desenvolvimento do tumor, há um aumento de fatores de crescimento econsequente angiogênese, que é o formação vascular a partir de vasos pré-existentes. Dessamaneira, uma forma de suprimir este crescimento das células malignas é diminuir aquantidade de nutrientes disponíveis, por meio do bloqueio da angiogênese. Evidênciassugerem que a Talidomida possui propriedades antiproliferativas, antiangiogênicas eredutoras do TNFα. Dessa forma, compreender melhor o comportamento desse fenômenoem células cancerígenas sob tratamento pode contribuir para o desenvolvimento de novosmétodos adjuvantes, o que possibilita melhorar a terapia e prognóstico de pacientes comcâncer de mama. Para realização do projeto, foram cultivadas células da linhagemMDA-MB-231 (adenocarcinoma mamário humano) em meio L-15 (Leibovitz Medium)suplementado com solução antibiótica e soro fetal bovino. Em seguida, seria realizado oteste de viabilidade com concentrações distintas de Talidomida e um grupo controle paradeterminação da citotoxidade da droga, pelo ensaio padrão por brometo de3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium (MTT). Posteriormente, cerca de 7x10⁵células por poço seriam plaqueadas e após 24h de incubação, metade das amostrasreceberiam tratamento com Talidomida, nas concentrações significativas determinadas apósa análise de viabilidade celular, enquanto a outra metade formaria o grupo controle. Por fim,seria realizado a extração de RNA e síntese de DNA destas células, para análise da expressãogênica, através do experimento de qPCR em tempo real. Infelizmente não foi possívelrealizar a pesquisa devido às limitações da pandemia do COVID-19.

O câncer é considerado o mal do século, segundo a OMS, sendo o de mama omais letal entre as mulheres. Diferenças metabólicas, em comparação com as célulassaudáveis, favorecem o desenvolvimento e a sobrevivência das células cancerígenas.Nesse sentido, as células neoplásicas apresentam níveis basais de espécies reativas deoxigênio (EROs) elevados, porém desenvolvem mecanismos de defesa através daprodução de enzimas com ação antioxidante - catalase, superóxido dismutase, glutationaperoxidase e glutationa - que evitam o estresse oxidativo e consequente morte celular.Uma vez que a ativação da AMPK nas células cancerígenas tratadas com metforminaestá associada à menor síntese de EROs, compreender melhor o comportamento dessefenômeno em células cancerígenas sob tratamento com metformina pode representarmais uma possibilidade no desenvolvimento de ferramentas que poderão ser utilizadas naterapia de combate ao câncer. Para realização do projeto, foram cultivadas células dalinhagem MDA-MB-231 (adenocarcinoma mamário humano) em meio L-15 (LeibovitzMedium). No teste de viabilidade foram semeadas cerca de 7x103 células, em triplicata,para o tratamento de 4 concentrações com metformina. A citotoxidade da droga nessascélulas foram determinadas pelo ensaio padrão por brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil tetrazolium (MTT). As placas foram lidas a 595 nm noespectofotômetro Spectramax M5 (Molecular Devices USA), sendo a porcentagem deinibição do crescimento celular determinada através da comparação da densidade celulardas células tratadas com as células controle. Para as análises da expressão gênica cercade 750x103 células foram plaqueadas e submetidas ao tratamento com metformina com3 concentrações distintas determinadas pelo resultado obtido no teste de viabilidade(1,25mM, 10mM e 20mM). Após o tempo de exposição de tratamento (24h), as célulasforam submetidas a extração de RNA utilizando o kit Power SYBR® Green Cells-to-CT™(Thermo Fisher Scientific). Posteriormente, foram sintetizados cDNAs com utilizaçãodo kit SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix(Invitrogen®). Para análise dosníveis de expressão gênica foram desenhados iniciadores para os genes que codificam asenzimas Superóxido Dismutase, Catalase e Heme Oxigenase, bem como para o gene docontrole endógeno (GAPDH), para utilização na técnica de PCR em tempo real. O testede viabilidade para as 5 concentrações de metformina, indicou uma mortalidade deaproximadamente 15,6% das células MDA-MB-231 tratadas com 1,25mM, 17,6% com2,5mM, 33,8% com 5mM, 52,55% com 10mM e, por fim, 78% de mortalidade com autilização de 20mM, demonstrando uma mortalidade dose-dependente. A partir da análisede variância com um fator (one-way ANOVA), constatou-se que há comparaçãoestatisticamente significativa entre o grupo controle e as concentrações 1,25mM, 10mM e20mM, sendo essas concentrações utilizadas nos ensaios para análise da expressão deenzimas antioxidantes. Os resultados da qPCR demonstraram que não houve alteraçãosignificativa nos níveis de expressão gênica destas enzimas em relação ao controle, fatoque pode estar relacionado com a menor produção de EROs nas células devido à inibiçãodo complexo I da cadeia transportadora de elétrons. Ainda nesse sentido, os estudos queinvestigam a relação entre a metformina e o estresse oxidativo em linhagens de célulascarcinogênicas mamárias ainda são escassos, apontando a necessidade em ampliar odesenvolvimento de pesquisas que investigam essa relação

Assunto de fundamental importância em Medicina Intensiva, a infusão venosa desedoanalgesia permite manutenção confortável de pacientes críticos com indicação deventilação mecânica (VM). Acúmulo de publicações das últimas 2 décadas apontam paramalefícios com uso excessivo de sedativos, quando comparada à utilização de protocolos desedação focados na racionalização do uso e diminuição da infusão desses fármacos. Oobjetivo desse estudo foi avaliar o impacto de protocolo de interrupção diária desedoanalgesia em pacientes críticos, em VM, internados em Unidade de Terapia Intensiva(UTI), com sepse pulmonar. Foi realizado estudo observacional retrospectivo comparativoentre população submetida a sedação profunda contínua (n= 55) versus grupo que recebeuprotocolo de interrupção diária de sedação (n= 39). Os grupos foram homogêneos comrelação a sexo, idade e escore de gravidade. A análise estatística evidenciou resultadosfavoráveis ao grupo que recebeu o protocolo de interrupção diária de sedação (grupo PSed):diminuição do tempo de VM (11,56 ±8,03 vs 18,76 ±14,82 dias, p=0,008); redução do tempode internação em UTI (12,27 ±8,09 vs 18,76 ±15,69 dias, p=0,021); e redução da taxa detraqueostomia (21 (38,18%) vs 19 (48,71%), p=0,309). A chance do paciente do grupo PSedde receber alta da UTI foi 8 vezes maior que no grupo controle (Hazard Ratio= 7,88 (IC 95%2,39-25,91, p=0,001)). Apesar da queda da mortalidade em 12,96% favorável ao grupo PSed,não encontramos significância estatística nessa amostra (p= 0,156). Esse estudo reiterou oobservado em acúmulo de outras publicações sobre estratégias de diminuição da infusão desedoanalgesia em UTI, demonstrando benefício da aplicação de protocolos de sedação namorbidade de pacientes críticos em VM. Outros estudos precisam revisar esse tema.

O câncer é considerado o mal do século, segundo a OMS, sendo o de mama o mais letal entre as mulheres. Baixos níveis de oxigênio e nutrientes são fatores limitantes do microambiente tumoral. Porém, a proliferação celular maligna é garantida pela sobrevivência e adaptação de células tumorais que apresentam perfil metabólico glicolítico anaeróbio e aeróbio. Nesse contexto, alterações metabólicas influenciam altamente a biologia dessas células. Assim, a metformina tem sido considerada uma possível droga adjuvante no tratamento de câncer, pois, apesar da incerteza sobre o principal fator antitumoral, a droga é capaz de promover a diminuição da concentração de insulina circulante e ativação da AMPK. Dessa forma, compreender melhor o comportamento desse fenômeno em células cancerígenas sob tratamento pode contribuir para o desenvolvimento de novas terapias combinadas, o que possibilita melhorar o tratamento e prognóstico dos pacientes. Para realização do projeto, as células da linhagem MDA-MB-231 (adenocarcinoma mamário humano) foram cultivadas em meio L-15 (Leibovitz Medium) suplementado com solução antibiótica e Soro Fetal Bovino. No teste de viabilidade foram semeadas cerca de 7x 10^3 células, em triplicata, para o tratamento de 5 concentrações com metformina e para o controle do experimento. A placa contendo as células foi incubada a 37°C, overnight. Após a adesão celular, foram adicionados ao meio metformina (100 mM, em água). A citotoxidade da droga nas células MDA_MB-231 foram determinadas pelo ensaio padrão por brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium (MTT), cuja a concentração seguiu as recomendações do fabricante. As placas foram lidas a 595 nm no espectofotômetro Spectramax M5 (Molecular Devices – USA). A porcentagem de inibição do crescimento celular foi determinada através da comparação da densidade celular das células tratadas com as células controle. Cerca de 750x10^3 células foram plaqueadas por poço para análise da expressão gênica. Após 24 h de incubação, entre 4 poços, três receberam tratamento com metiformina, e um formou o grupo controle. Após o tempo de exposição de 24h, as células foram submetidas a extração de RNA utilizando o kit Power SYBR® Green Cells-to-CT™ (Thermo Fisher Scientific), seguindo as recomendações do fabricante. A fim de analisar a expressão de três genes da via glicolítica, serão desenhados iniciadores para os genes que codificam as enzimas hexocinase, fosfofrutocinase e piruvato cinase, bem como para os genes do controle endógeno (tubulina e miosina), para utilização na técnica de qPCR em tempo real. O teste de viabilidade, no qual foram testadas 5 concentrações de metformina, indicou uma sobrevida de aproximadamente 84,4% das células MDA-MB-231 tratadas com 1,25mM, cerca de 82,4% com 2,5mM de metformina, 66,2% sobreviveram na concentração de 5mM, 47,45% na presença de 10mM e, por fim, 22% de sobrevida com a utilização de 20mM. Os experimentos de qPCR em tempo real estão em processo de finalização. Dessa forma, a conclusão do projeto será melhor elucidado após o termino do experimento de qPCR em tempo real