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Pour notre étude, nous avons obtenu quatre fractions flavonoïques à partir de l’extrait brut de feuilles de Ballota hirsuta Benth. La séparation des flavonoïdes par chromatographie sur couche mince révèle la présence des molécules flavonoïques en particulier dans la fraction chloroformique et l’acétate d’éthyle. Les résultats de l’HPLC montrent la présence de la naringine dans la fraction n-BuOH, de la sylibine et de la taxifoline dans la fraction d’acétate. Une forte activité inhibitrice des quatre extraits a été remarquée sur Escherichia coli ATCC 25922 et Staphylococcus aureus ATCC 13565. En revanche, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27835 s’est révélée résistante par rapport aux autres bactéries, cela est dû à la structure de sa paroi qui lui confère cette résistance. Les concentrations minimales inhibitrices varient entre 0,25 et 2 mg/ml en fonction de l’extrait flavonoïque et de la souche microbienne.