Hintergrund: Viele homöopathische Arzneimittel werden auch für die Behandlung parodontaler Entzündungsprozesse eingesetzt. Über deren Wirkprinzipien ist allerdings nur wenig bekannt. Ziel dieser Studie war es daher, die Effekte verdünnter Substanzen auf die Migrationsaktivität von Lymphozyten bei parodontalen Entzündungsprozessen in vitro zu untersuchen. Material und Methoden: Lymphozyten wurden aus Blutproben von 3 Parodontitispatienten und 3 gematchten gesunden Probanden extrahiert und zusammen mit verdünnten wässrigen Extrakten (D12 and C200) von Mercurius solubilis, Silicea, Sulfur, Tuberculinum oder Placebo in eine Kollagenmatrix eingebettet. Nach einer 60-minütigen mikroskopischen Videoaufzeichnung im Zeitraffer wurden die Migrationsaktivität und -geschwindigkeit der Lyphozyten von je 30 randomisiert ausgewählten Zellen nachvollzogen. Neben univariaten statistischen Verfahren wurde eine SiZer-Zeitreihenanalyse durchgeführt. Ergebnisse: Während bei den Hochverdünnungen (C200) keine bedeutenden Unterschiede zwischen Placebo und den Substanzen gefunden wurden, konnten bei den niedrigen Verdünnungen (D12) im Vergleich zu Placebo starke Effekte beobachtet werden. Die stärksten Effekte wurden in den mit Sulfur D12 exponierten Lyphozyten beobachtet. Während bei den Lymphozyten der Parodontitispatienten ein spezifischer Aktivierungseffekt (mittlere Aktivität: 11,1% (Placebo) vs. 23,8% (Verum)) festgestellt werden konnte, blieb dieser bei den gesunden Probanden aus (25,8% (Placebo) vs. 25,6% (Verum)). Dieser Effekt konnte auch durch die SiZer-Zeitreihenanalyse als signifikant bestätigt werden. Schlussfolgerung: Die Debatte um die Wirkprinzipien von hochverdünnten Substanzen wird immer noch kontrovers geführt. Trotz der geringen Teilnehmerzahl und den damit verbundenen Limitierungen in der Aussagekraft sind insbesondere die Ergebnisse für Sulfur D12 ermutigend. Diese sollten in nachfolgenden Experimenten überprüft und durch weitere immunologische Versuche wie z.B. die Durchflusszytometrie von Zellinien verifiziert werden.

Introduction: Arnica montana is a plant belonging to the Compositae family and one of the most popular medications used in complementary and homeopathic medicine to treat inflammation, wounds, hematoma, contusion and pain. Recently has been pointed out the double role of the sesquirterpenic lactone helenalin in the inhibition of the transcription factor NF-KB directly targeting p65 and in the gene suppression of the same subunit. This study considers the changes due to different homeopathic dilutions in gene expression of several cytokines, chemokines and receptor by real-time PCR technique in monocyte/ macrophage cellular model.Methods: The effect of Arnica m. on gene modulation of human monocytes (THP-1 cell line) was analyzed with RT-ARRAY PCR technique. THP-1 cells differentiated into activated macrophages by phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) for 48 h were challenged with different homeopathic dilutions of Arnica m. (2c, 3c, 5c, 9c and 15c diluted/ dynamized in water, with 0.03% ethanol final concentration) and with control solution (water with 0.03% ethanol). Drug-treated and untreated macrophages were incubated for 24 h in the absence and in the presence of 10 ng/ml E. Coli lipopolysaccharide (LPS). Total RNA was extracted and retro-transcribed into cDNA to quantify the relative amount of gene trascripts (SYBR Green dye) in treated cells respect to placebo (DDCt method).Results and discussion: The treatments with Arnica m. homeopathic dilutions in cell cultures without LPS induced a significant changes in gene expression modulation for the CCL2 (Freg = À40%), IL-1B (Freg = À50%) and TNF-a (Freg = À25%), compared with vehicle solution. The effect was not linearly related to dilution/dynamization, showing a pattern of down-regulation genes in all dilutions tested, with the exception of 15c. Different patterns were observed in the presence of LPS, where only BMP2 gene resulted slightly up-regulated (Freg = +20%). Our findings are compatible with a mild modulation of inflammatory process by homeopathic dilutions/dynamizations of this plant, even if further studies are needed to clarify the molecular targets.

Background: Several homeopathic drugs are applied in the treatment of periodontal inflammation. However less is know about the basic working principles of highly diluted remedies in such chronic inflammatory conditions. We therefore aimed at investigating the effects of homeopathic drugs in periodontal inflammation by observing lymphocyte migration activity. Material and Methods: Lymphocytes from blood samples of three patients suffering on chronic aggressive periodontitis and three matched healthy volunteers were extracted and enbedded in a collage matrix migration assays together with highly diluted (D12 and C200) aquaetous extract from Mercurius solubilis, Silicea, Sulfur, Tuberculinum, or placebo. Activity and speed of lyphocytes were observed in a 60 min time frame using flow cytometry. Statistical analysis was performed using univariate statistics and SiZer time series analysis. Results: A significantly reduced migration activity and speed was observed in lymphocytes extracted from the patients suffering on chronic aggressive periodontitis compared to those of healthy volunteers (mean activity: 12.5% vs. 26.3%). While C-potencies did not reveal strong differences between placebo and substances some meaningful effects were observed in D-potencies compared with placebo: moderate but not significant inhibiting effects with regards to activity were observed in lymphocytes treated with Silicea extract (mean activity: 13.3% vs. 11.9% in patients? and 26.2% vs. 22.2% in healthy samples). The strongest and most specific effects were observed in Sulphur D12 which showed an activating effect in lymphocytes of patients (mean activity: 11,1% vs. 23,8%) but not in those of healthy volunteers (25,8% vs. 25,6%). SiZer analysis confirmed this effect to be significant. Conclusion: Discussion about the basic working principles of highly diluted substances is still vital and leads to controversies in the scientific discussion. Although conclusions are limited due to low sample size, our pilot study was able to reproduce former results on lymphocyte migration activity and thus proves model validity. Results from our pilot study might encourage further investigations on the role of highly diluted Sulphur in the treatment of periodontitis.

Hintergrund: Bei der Behandlung parodontaler Entzündungen werden in der Versorgungspraxis auch homöopathische Mittel eingesetzt. Noch ist weniger über deren grundlegende Wirkprinzipien bekannt. Ziel dieser Arbeit war es daher, die Auswirkungen potenzierter Substanzen bei parodonta­ler Entzündung mittels Durchflusszytometrie zu untersuchen. Material und Methoden: Lymphozyten aus Blutproben von drei Parodontitis-Patienten und drei gematchten gesunden Probanden wurden extrahiert und mit stark verdünnten wässrigen Extrakten (D12 und C200) aus Mercurius solubilis, Silicea, Sulphur, Tuberculinum oder Placebo inkubiert. Um die Lymphozytenexpression zu untersuchen, wurde die Durchflusszytometrie für CD45R0- und CD25-Antikörper angewandt. Die statistische Analyse wurde unter Verwendung von Histogramm- und bivariaten Dot-Plot-Analysen durchgeführt. Ergebnisse: Veränderungen der Expression von CD25 und CD45R0 wurden bei Mercurius C200, Mercurius D12, Silicea D12 und Sulphur D12 beobachtet. Mit 36,47% zeigte Sulphur D12 die höchsten Veränderungen in der CD45R0-Expression zwischen Verum und Placebo bei den Parodontitis-Patienten. Die CD25-Expression war in Mercurius D12 mit 18,68% am höchsten. Aufgrund der hohen Variabilität konnten die Ergebnisse jedoch nicht durch statistische Analysen untermauert werden. Diskussion: Diese Studie konnte zeigen, wie Effekte hoch verdünnter Substanzen mit modernen immunologischen Methoden analysiert werden können. Obwohl die Schlussfolgerungen aufgrund der hohen Variabilität der Lymphozytenexpression begrenzt sind, könnten die Ergebnisse dieser Pilotstu­die weitere Untersuchungen anregen.