RESUMO A Reserva Biológica (REBIO) do Mato Grande é uma unidade de conservação localizada no município de Arroio Grande, no sul do Rio Grande do Sul. A sua zona de amortização possui 40 propriedades rurais cadastradas no sistema irrigante da Fundação Estadual de Proteção Ambiental do Rio Grande do Sul, das quais 82% utilizam Roundup (original e transorb), que tem como princípio ativo o glifosato. O objetivo deste trabalho foi analisar o impacto ambiental da atividade agrícola na REBIO Mato Grande por meio de marcadores de poluentes no ambiente e a comunidade de macroinvertebrados bentônicos em três pontos do Arroio Moreira, por ser o que mais contribui com volume hídrico. O indicador de lançamento de efluentes domésticos (alquilbenzeno linear sulfonado) não foi encontrado nas estações de coleta analisadas, o que mostra que os impactos sobre a fauna aquática não possuem contribuição significativa de atividades domésticas. Por outro lado, o marcador de atividade agrícola glifosato foi encontrado em um dos pontos (0,08 mg.L−1), estando acima do valor máximo permitido (0,065 mg.L−1) pela Resolução do Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA) nº 357/2005. Ocorreu diminuição em todas as métricas biológicas analisadas (riqueza, índice de diversidade de Shannon-Wiener e abundância) e alterações dos parâmetros abióticos como oxigênio dissolvido, condutividade, turbidez e sólidos totais dissolvidos. Permitindo concluir que a orizicultura contribui significativamente para a perturbação do ambiente analisado.