O câncer é considerado o mal do século, segundo a OMS, sendo o de mama omais letal entre as mulheres. Diferenças metabólicas, em comparação com as célulassaudáveis, favorecem o desenvolvimento e a sobrevivência das células cancerígenas.Nesse sentido, as células neoplásicas apresentam níveis basais de espécies reativas deoxigênio (EROs) elevados, porém desenvolvem mecanismos de defesa através daprodução de enzimas com ação antioxidante - catalase, superóxido dismutase, glutationaperoxidase e glutationa - que evitam o estresse oxidativo e consequente morte celular.Uma vez que a ativação da AMPK nas células cancerígenas tratadas com metforminaestá associada à menor síntese de EROs, compreender melhor o comportamento dessefenômeno em células cancerígenas sob tratamento com metformina pode representarmais uma possibilidade no desenvolvimento de ferramentas que poderão ser utilizadas naterapia de combate ao câncer. Para realização do projeto, foram cultivadas células dalinhagem MDA-MB-231 (adenocarcinoma mamário humano) em meio L-15 (LeibovitzMedium). No teste de viabilidade foram semeadas cerca de 7x103 células, em triplicata,para o tratamento de 4 concentrações com metformina. A citotoxidade da droga nessascélulas foram determinadas pelo ensaio padrão por brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil tetrazolium (MTT). As placas foram lidas a 595 nm noespectofotômetro Spectramax M5 (Molecular Devices USA), sendo a porcentagem deinibição do crescimento celular determinada através da comparação da densidade celulardas células tratadas com as células controle. Para as análises da expressão gênica cercade 750x103 células foram plaqueadas e submetidas ao tratamento com metformina com3 concentrações distintas determinadas pelo resultado obtido no teste de viabilidade(1,25mM, 10mM e 20mM). Após o tempo de exposição de tratamento (24h), as célulasforam submetidas a extração de RNA utilizando o kit Power SYBR® Green Cells-to-CT™(Thermo Fisher Scientific). Posteriormente, foram sintetizados cDNAs com utilizaçãodo kit SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix(Invitrogen®). Para análise dosníveis de expressão gênica foram desenhados iniciadores para os genes que codificam asenzimas Superóxido Dismutase, Catalase e Heme Oxigenase, bem como para o gene docontrole endógeno (GAPDH), para utilização na técnica de PCR em tempo real. O testede viabilidade para as 5 concentrações de metformina, indicou uma mortalidade deaproximadamente 15,6% das células MDA-MB-231 tratadas com 1,25mM, 17,6% com2,5mM, 33,8% com 5mM, 52,55% com 10mM e, por fim, 78% de mortalidade com autilização de 20mM, demonstrando uma mortalidade dose-dependente. A partir da análisede variância com um fator (one-way ANOVA), constatou-se que há comparaçãoestatisticamente significativa entre o grupo controle e as concentrações 1,25mM, 10mM e20mM, sendo essas concentrações utilizadas nos ensaios para análise da expressão deenzimas antioxidantes. Os resultados da qPCR demonstraram que não houve alteraçãosignificativa nos níveis de expressão gênica destas enzimas em relação ao controle, fatoque pode estar relacionado com a menor produção de EROs nas células devido à inibiçãodo complexo I da cadeia transportadora de elétrons. Ainda nesse sentido, os estudos queinvestigam a relação entre a metformina e o estresse oxidativo em linhagens de célulascarcinogênicas mamárias ainda são escassos, apontando a necessidade em ampliar odesenvolvimento de pesquisas que investigam essa relação