El cultivo in vitro es una técnica que ha permitido la propagación de distintas especies de orquídeas, pero el lento crecimiento de este grupo de plantas, así como el costo de las sales minerales y del agente gelificante (agar) empleados en los medios de cultivo, pueden limitar su aplicación. El objetivo del presente trabajo fue conocer el efecto de la composición del medio de cultivo y el uso de sustratos como sustitutos del agar en el crecimiento in vitro de Laelia anceps Lindl. y Epidendrum sp. Brotes adventicios de ambas especies se cultivaron in vitro en distintas mezclas de sustratos (perlita, tezontle y fibra de coco) y agar con diferentes concentraciones de las sales basales de Murashige y Skoog  (50 y 100%) y ácido giberélico (AG3) (0 y 1 mg L-1) para evaluar su longitud, número de hojas, número de raíces y peso fresco en un diseño experimental con tres factores y 15 repeticiones, cada repetición consistio  en un frasco con 5 brotes adventicios. El comportamiento in vitro estuvo en función del genotipo; L. anceps Lindl. respondió mejor que Epidendrum sp. Los brotes crecidos sobre perlita-tezontle o fibra de coco-tezontle, y medios con sales al 50% y AG3 no mostraron diferencias significativas en cuanto a su longitud, número de hojas, número de raíces y peso fresco, con respecto a aquellos que lo hicieron en agar, sales al 100% y sin AG3. Los medios de cultivo con sales diluidas sin AG3 y sustratos como sustitutos del agar, permitieron el crecimiento in vitro de las plantas de  L. anceps Lindl. y Epidendrum sp. con una reducción significativa del 60 % de los costos.