The mucopolysaccharide capsule of Cryptococcus neoformans and other pathogenic yeasts prevent the extraction of DNA from these important zoonotic agents. We report that the use of a lysis buffer containing a high concentration of urea is an easy, efficient and time-saving technique to obtain high yields of good-quality DNA for molecular diagnosis. The use of urea also prevents the degradation of DNA during storage of samples at room temperature for up to 6 months.

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Se describe un método basado en análisis por primer extension para genotipar simultáneamente 7 SNPs relacionados con el crecimiento y la calidad de la carne en porcino. Las muestras de ADN genómico fueron obtenidas de 193 animales pertenecientes a varias razas (54 Ibérico, 63 Duroc, 47 Large White-Landrace x Large White) y a jabalí (29). A partir de las secuencias de los genes H-FABP, MC4R y LEPR, se diseñaron 4 parejas de cebadores con el fin de amplificar las regiones del genoma porcino que contienen esos 7 SNPs. La reacción de minisecuenciación primer extension (ABI PRISM SNaPshot MultiplexTM kit. Applied Biosystem) se realizó con cebadores diseñados en las regiones flanqueantes de cada uno de los SNPs de interés. Los genotipos fueron identificados por mini-secuenciación con ABIPrism 3130 y GeneMapper 3.7 (Applied Biosystems) pudiéndose así discriminar, en una sola reacción, los diferentes alelos de los 7 SNPs de cada animal. Gracias a esta técnica han sido detectados los polimorfismos T221C y C233T del gen LEPR (Genbank AF092422), que no eran reconocibles por enzimas de restricción. Este método permite identificar los animales con genotipo más deseables para la selección.