BackgroundSegregation of expression plasmids leads to loss of recombinant DNA from transformed bacterial cells due to the irregular distribution of plasmids between the daughter cells during cell division. Under non-selective conditions this segregational instability results in a heterogeneous population of cells, where the non-productive plasmid-free cells overgrow the plasmid-bearing cells thus decreasing the yield of recombinant protein. Amongst the factors affecting segregational plasmid instability are: the plasmid design, plasmid copy-number, host cell genotype, fermentation conditions etc. This study aims to investigate the influence of transcription and translation on the segregation of recombinant plasmids designed for constitutive gene expression in Escherichia coli LE392 at glucose-limited continuous cultivation. To this end a series of pBR322-based plasmids carrying a synthetic human interferon-gamma (hIFNγ) gene placed under the control of different regulatory elements (promoter and ribosome-binding sites) were used as a model.ResultsBacterial growth and product formation kinetics of transformed E. coli LE392 cells cultivated continuously were described by a structured kinetic model proposed by Lee et al. (1985). The obtained results demonstrated that both transcription and translation efficiency strongly affected plasmid segregation. The segregation of plasmid having a deleted promoter did not exceed 5% after 190 h of cultivation. The observed high plasmid stability was not related with an increase in the plasmid copy-number. A reverse correlation between the yield of recombinant protein (as modulated by using different ribosome binding sites) and segregational plasmid stability (determined by the above model) was also observed.ConclusionsSwitching-off transcription of the hIFNγ gene has a stabilising effect on ColE1-like plasmids against segregation, which is not associated with an increase in the plasmid copy-number. The increased constitutive gene expression has a negative effect on segregational plasmid stability. A kinetic model proposed by Lee et al. (1985) was appropriate for description of E. coli cell growth and recombinant product formation in chemostat cultivations.

No abstract

Резонансный переход атомарного водорода (лаймановское альфа-излучение) 2 P-2 S является самой яркой особенно-стью солнечного спектра в далекой ультрафиолетовой области. Перенос лаймановского альфа-излучения зависит от ре-зонанса, рассеивающегося из атомов водорода в атмосферу, и от поглощения (радиоволн) кислородом. Поскольку ос-лабление лаймановского альфа-излучения в атмосфере является показателем столбов плотности молекул кислорода, из этого можно рассчитать профили плотности и температуры O 2 в атмосфере.Отделением Лаборатории солнечно-земных воздействий (ЛСЗВ) в Стара Загора был изготовлен детектор солнечного лаймановского альфа-излучения. Базовая деталь -камера ионизации, заполненная NO. К камере подсоединен источник питания в 60 В. Производимый фотоэлектрический ток из датчика подается в 2-канальный усилитель, обеспечивая аналоговый сигнал.Нами были проведены исследования характеристик детектора лаймановского альфа-излучения. Он успешно прошел все испытания, и результаты показали, что такой инструмент мог бы использоваться в экспериментах с участием ракет для измерения потока лаймановского альфа-излучения.Вертикальный профиль лаймановского альфа-излучения можно получить по данным измерений детектора. Созданы программы для вычисления плотности O 2 , атмосферной мощности и профилей распределения температур, основанных на данных лаймановского альфа-излучения.Совместная конструкция детектора осуществлялась в рамках проекта ОСПЛАИ (Ослабление Солнечного Потока Лаймановского Альфа-Излучения), проекта научного сотрудничества между STIL -Болгарской академии наук, Отделение в Стара Загора, и Группой физики атмосферы в Отделении метеорологии стокгольмского Университета (ОМСУ), Швеция. Совместный проект был частью ракетного эксперимента HotPay I, в проекте ALOMAR eARI, 6 -ой Рамочной Программы ЕС, Андойя Рокет Рейндж, Анденес, Норвегия.Проект частично финансируется Болгарским министерством науки и образования.The resonance transition 2 P-2 S of the atomic hydrogen (Lyman-alpha emission) is the strongest and most conspicuous feature in the solar EUV spectrum. The Lyman-alpha radiation transfer depends on the resonance scattering from the hydrogen atoms in the atmosphere and on the O 2 absorption. Since the Lyman-alpha extinction in the atmosphere is a measure for the column density of the oxygen molecules, the atmospheric O 2 density and temperature profiles can be calculated thereof.