The analysis of heart rate variability (HRV) in the time domain was performed by dynamic electrocardiographic monitoring for twenty-four hours (Holter method) in ten male and ten female healthy mixed-breed dogs before and after four weeks of oral supplementation with long-chain polyunsaturated fatty acids (PUFAs) derived from omega n-3 [497 mg docosahexaenoic acid (DHA) and 780 mg eicosapentaenoic acid (EPA)]. Males received an average dose of 34.9 mg DHA/kg and 22.2 mg EPA/kg, whereas females received an average of 27 mg DHA/kg and 43 mg EPA/kg. HRV indices calculated in the time domain were the following: NN, SDNN, SDANN, SDNN index, pNN50, rMSSD and heart rate, taking into account the effects of gender and supplementation. The results showed no significant effects of supplementation or gender on the indices; thus, dietary supplementation with omega PUFAs derived from n-3 over four weeks did not decrease heart rate and did not increase heart rate variability in healthy dogs. Key words: Dog, HRV, PUFAs, holter ResumoA análise da variabilidade da frequência cardíaca (VFC) no domínio do tempo, foi realizada por meio da monitorização eletrocardiográfica dinâmica em vinte e quatro horas (Holter), em cães sadios, sem raça definida, sendo dez machos e dez fêmeas, antes e após suplementação oral, por quatro semanas com ácido graxos poliinsaturados de cadeia longa (PUFAS) derivados do ômega n-3 [497 mg ácido docosahexaenóico (DHA) e 780 mg ácido eicosapentanóico (EPA)], resultando em uma dose média de 34,9 mg/kg de EPA e 22,2 mg/kg de DHA em machos e média de 43 mg/kg de EPA e 27 mg/kg em fêmeas. Os índices da VFC calculados no domínio do tempo foram: NN, SDNN, SDANN, SDNN índex, pnn50 e rMSSD e frequência cardíaca, verificando-se o efeito do sexo e da suplementação. Os resultados obtidos não demonstraram efeitos significativos da suplementação ou influência do sexo