Introducción: La tifosis aviar y la pulorosis, enfermedades ocasionadas por Salmonella enterica subsp. enterica serotipo Gallinarum biotipo Gallinarum y biotipo Pullorum respectivamente, son responsables de una elevada mortalidad en aves de corral generando grandes pérdidas económicas para los avicultores. Objetivo: Fortalecer la detección de los agentes causales de la tifosis aviar y la pulorosis mediante la optimización de técnicas moleculares, tales como la PCR punto final y la PCR tiempo real (qPCR). Métodos: Se emplearon cepas bacterianas control, aislamientos y tejidos de aves de corral infectadas con Salmonella Gallinarum para estandarizar la detección mediante PCR punto final y qPCR. Resultados: Para la PCR punto final se obtuvo una repetibilidad, especificidad y sensibilidad del 100%, y un valor Kappa de 0.98 para la reproducibilidad. Mientras que, con la qPCR se obtuvo una eficiencia del 103% y valores de repetibilidad y reproducibilidad con coeficientes de variación menores al 6%. El límite de detección de ADN genómico fue de 6.4 pg/μL y el del número de células viables de 3x102 UFC/mL para la PCR punto final y de 10 copias de ADN por reacción para la qPCR. Mediante la secuenciación y análisis de los productos de PCR, la topología de taxonomía molecular posicionó a las cepas de este estudio junto con las del serotipo S. Gallinarum, corroborando su identidad. Conclusión: Se logra optimizar una técnica molecular que permite una detección rápida, confiable y sensible de Salmonella Gallinarum/Pullorum, lo cual puede reducir el tiempo de espera para tomar acción en casos de sospecha clínica y posibles brotes.