Las infecciones nosocomiales por Staphylococcus aureus tiene una alta prevalencia, debido a que esta bacteria forma parte de la microbiota de la piel del personal de salud y pacientes. Este microorganismo debido a su ubicuidad está presente en superficies y fómites, convirtiéndose en vectores para la trasmisión de infecciones. Objetivo. Describir el perfil de susceptibilidad antibiótica de cepas de S. aureus aisladas en superficies de un hospital de la ciudad de Cuenca. Materiales y métodos. Se realizó un estudio con enfoque cuantitativo, de corte transversal, descriptivo. Se recolectaron 200 muestras de diferentes superficies de áreas hospitalarias, en las que se identificó S. aureus mediante la amplificación de genes nucA Y femB. La susceptibilidad fenotípica a los antibióticos se determinó por el método de Kirby Bauer. Resultados. Se identificaron 6 cepas de S. aureus distribuidas de la siguiente manera: 2 cepas en el área de emergencia (33.33%) y 1 cepa (16.66%) en cada una de las áreas de: vestidores, rayos X, ecografía y odontología. La totalidad de estos aislados resultaron resistentes a: penicilina, oxacilina y amoxacilina; sensibles a trimetoprim sulfametoxazol, rifampicina, tetraciclina, cloranfenicol, vancomicina y linezolid. En el caso de la gentamicina se encontró: 3 cepas sensibles, 1 con sensibilidad intermedia y 2 resistentes. Conclusión. Se aislaron 6 cepas de S. aurues, en las cuales se pudo medir la susceptibilidad a diferentes antibióticos.