RESUMOA formação de biofilme por Pseudomonas aeruginosa propicia o aumento da patogenicidade e resistência desse micro-organismo a condições adversas. Na forma séssil, a P. aeruginosa pode ser resistente a concentrações inibitórias 100 vezes maiores do que quando crescendo na forma planctônica. Este trabalho teve como objetivo estudar a formação de biofilmes por P. aeruginosa em microplacas de poliestireno nos meios de cultura de caldo de Soja Tripticaseína (TSB) e Água Peptonada (AP) com incubações de 24 e 48 horas para a quantificação da biomassa total formada pelo método do cristal violeta. Foram utilizadas cepas-padrão de P. aeruginosa American Type Culture Collection (ATCC 9027 e ATCC 27853) e um isolado de fígado de frango comercial. Os resultados permitiram a otimização da técnica por meio da determinação que as melhores condições para formação de biofilme ocorreram em caldo mais nutritivo (TSB) com o tempo de incubação de 24h para as cepas-padrão, enquanto que o isolado de fígado de frango apresentou baixos níveis de formação de biofilme de forma semelhante nas condições avaliadas. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que o caldo de cultura com maior disponibilidade de nutrientes propiciou maior formação de biofilme das cepas-padrão de P. aeruginosa em 24h de incubação. PALAVRAS-CHAVE: adesão bacteriana, biomassa total, cristal violeta. ABSTRACTBiofilm formation by Pseudomonas aeruginosa can provide increased pathogenicity and resistance to adverse conditions such as the antimicrobials agents resistence that may be ineffective against sessile forms, even at concentrations 100 times