Forty-nine isolates of Trichoderma from the Brazilian Midwest were evaluated for their antagonistic activity in vitro against Sclerotinia sclerotiorum (causal agent of white mold), which were then identified based on their nuclear ribosomal ITS sequences. Paired culture tests showed that all isolates exhibited some antagonism, with a maximum of 77% mycelial inhibition and complete inhibition of sclerotia production. Two isolates were found to be the most promising biocontrol agents, considering both antagonistic parameters (CEN1253 -T. koningiopsis and CEN1265 -T. brevicompactum). Five different species were identified: T. harzianum (23), T. spirale (9), T. koningiopsis (8), T. brevicompactum (7) and T. asperellum (2). These isolates are stored in the Embrapa Fungi Collection for Biological Control and the information obtained in the experiments will be incorporated into the database of biological assets within the genetic resources information system (Allele) and be made available for further studies. Resumo: Quarenta e nove isolados de Trichoderma obtidos no centro-oeste do Brasil foram avaliados quanto a sua atividade antagônica in vitro contra Sclerotinia sclerotiorum (agente causal do mofo branco) e identificados com base nas sequências ITS do DNA ribossômico nuclear. Os testes de cultivo pareado mostram que todos os isolados exibiram algum antagonismo, com um máximo de 77% de inibiação micelial e inibição total da produção de escleródios. Dois isolados se destacaram como os mais promissores, considerando ambos os parâmetros avaliados (CEN1253 -T. koningiopsis e CEN1265 -T. brevicompactum). Cinco espécies diferentes foram identificadas: T. harzianum (23), T. spirale (9), T. koningiopsis (8), T. brevicompactum (7) and T. asperellum (2). Estes isolados estão armazenados na Coleção de Fungos para Controle Biológico da Embrapa e as informações obtidas nos experimentos serão incorporadas na base de dados de ativos biológicos, no sistema de informações de recursos genéticos, e disponibilizados para estudos futuros. Palavras-chave: Recursos genéticos microbianos, identificação molecular, biocontrole, mofo branco.