O presente estudo avaliou a toxicidade do óleo essencial de Lippia origanoides em tambaqui (Colossoma macropomum) e sua atividade in vivo frente à Aeromonas hydrophila. Para os testes de toxicidade, tambaquis foram expostos a 0, 5, 10, 12,5, 15, 17,5 e 20 mg L-1 do óleo essencial de L. origanoides por 96 horas. A concentração média letal (CL50) foi estimada em 15,2 mg L-1. Após exposição dos tambaquis às concentrações subletais de L. origanoides (7,6 e 11,4 mg L-1) por 96 horas, poucas alterações hematológicas e bioquímicas como aumento no volume corpuscular médio e decréscimo nos valores de proteínas totais foram observadas na concentração de 7,6 mg L-1, o que não compromete a homeostase orgânica dos peixes. Tambaquis experimentalmente infectados com A. hydrophila alcançaram maior taxa de sobrevivência (79,2%) após banho terapêutico com 10 mg L-1 do óleo essencial de L. origanoides. Portanto, o tambaqui exibe moderada tolerância ao óleo essencial de L. origanoides e este óleo tem potencial para uso no tratamento de tambaqui (C. macropomum) infectado com A. hydrophila.