A complexidade na qual o trabalho odontológico está inserido pode resultar em falhas com relação às medidas de biossegurança e expor todos os envolvidos aos riscos biológicos inerentes à profissão, resultando no comprometimento da eficiência e segurança do trabalho. A integração ensino-serviço demonstra ser uma valiosa estratégia de aprimoramento, atualização e incorporação de conhecimentos, resultando em melhorias no serviço em saúde, sendo esta integração sempre necessária principalmente quando do surgimento de novos riscos biológicos, como observado na atual pandemia da COVID-19. Desta forma, foi proposto analisar o conhecimento e a execução das medidas de biossegurança das auxiliares e técnicas em saúde bucal vinculadas ao setor público de saúde do Município de Três Lagoas, Estado de Mato Grosso do Sul (MS). Para tanto, foi realizada a aplicação de questionário antes e após curso de capacitação e atividade prática sobre biossegurança, elaborado e ministrados por dentistas vinculadas à equipe de saúde bucal do mesmo setor. Este estudo transversal utilizou-se de um questionário semiestruturado, autoaplicável, dividido em processo de trabalho, preparo do operador e preparo do ambiente. Foi observado que, de modo geral, houve a compreensão da importância da biossegurança pelas auxiliares e técnicas em saúde bucal. Entretanto, observouse uma melhor percepção das falhas cometidas nos procedimentos de biossegurança e dos riscos de acidentes no ambiente de trabalho após a capacitação. Os métodos de prevenção dos riscos biológicos apontados pelas profissionais foram relacionados somente ao uso de equipamentos de proteção individual (EPIs), sendo compreendidos após a capacitação que EPIs, vacinação e higiene das mãos são os métodos eficazes de prevenção no trabalho em saúde. Também foi observado um melhor entendimento quanto à necessidade de limpeza das superfícies com água e sabão previamente ao uso de desinfetantes, assim como a realização da sequência correta de paramentação e desparamentação para a efetiva proteção fornecida pelos EPIs, com ênfase no uso adequado das máscaras N95 e protetor facial. Deste modo, verificou-se que as auxiliares e técnicas em saúde bucal aplicam medidas de biossegurança durante o seu trabalho, entretanto, a execução dos procedimentos visando eliminar, prevenir e reduzir riscos foram reavaliados e reconsiderados, principalmente no atual cenário da pandemia ocasionada pelo coronavírus.Palavras-chave: medidas de biossegurança, odontologia, equipes de saúde bucal, técnicos em saúde bucal, sistema único de saúde.