Objetivo: identificar as reações comportamentais de crianças pré-escolares durante a vacinação com a utilização do brinquedo terapêutico instrucional. Método: estudo descritivo, transversal e quantitativo. Participaram 12 crianças de 3 a 6 anos, que foram vacinadas em uma clínica de imunização privada em Santa Catarina. Os dados foram coletados em três etapas: no preparo da criança para a vacinação, utilizando o brinquedo terapêutico instrucional durante a vacinação e após a vacinação. Resultados: das reações comportamentais na criança 9 obtiveram  associações significativas com o teste Exato de Fischer: aproxima-se com facilidade do pesquisador (0,045); demonstra-se com medo dos brinquedos (0,018); brinca interativamente expressando suas emoções (0,045); assume e demonstra liderança (0,045); mostra-se seguro (0,045); demonstra alegria (0,045); atitudes verbalizadas (0,045); agarra-se ao cuidador (0,045); finge não ouvir o que o pesquisador está dizendo (0,018). Conclusão: as reações comportamentais positivas foram identificadas em crianças preparadas com o brinquedo terapêutico instrucional para a vacinação.