Summary Specimens of 4 marine fish species 3 from genus Trachinotus, T. carolinus, T. falcatus, T. goodei, and 1 from genus Selene, S. vomer belonging to the family Carangidae (Perciformes) were analyzed. All the specimens analyzed inhabit the South/Southeast coast of Brazil, and were sampled from the locality São Sebastião, SP. The 4 species presented 2nϭ48 chromosomes, being the chromosome formula for Selene vomer 46Aϩ2ST, T. carolinus 8MSMϩ40A, T. falcatus 38Aϩ10MSM and T. goodei 4MSMϩ44A chromosomes. The 4 species presented 1 pair of NORs. Small blocks of heterochromatin were found in these 4 species. The karyotypic characteristics of these species were discussed in comparison with other species and populations of Perciformes already analysed. The cytogenetic analysis of fish species is well advanced for the freshwater fish that inhabit Brazilian rivers, and a growing number of species is being analyzed, so that an expressive amount of information is currently available for this group. This fact results in a great amount of data about the evolutionary relationship of species and genera of freshwater species. In some cases, the cytogenetic information associated with molecular markers was used in the description of new species (Albert et al. 1999). When compared with the amount of data available for freshwater fish species from the Neotropical region, the cytogenetic information about marine fishes from the Brazilian coast is still incipient. Key wordsIn a preliminary analysis of Trachinotus carried out by Zeinad and Almeida-Toledo (1994) the chromosome number and morphology for T. carolinus and T. falcatus were established. Pauls et al. (1998) and Netto et al. (1998) described respectively the karyotype of T. goodei and the chromosome number and formula of Selene volmer. All these analysis were performed using conventional Giemsa staining. However, no data about the C-banding pattern of heterochromatin or nucleolus or-
Iron is an essential nutrient that is poorly available to living organisms but can be harmful when in excess due to the production of reactive oxygen species. Bacteria and other organisms use iron storage proteins called ferritins to avoid iron toxicity and as a safe iron source in the cytosol. The alpha-proteobacterium Caulobacter crescentus has two putative ferritins, Bfr and Dps, and some other proteins belonging to the ferritin-like superfamily, among them the one encoded by CC_0557. In this work, we have analyzed the role and regulation of these three putative ferritin-like proteins. Using lacZ-transcriptional fusions, we found that bfr expression is positively regulated (2.5-fold induction) by the Fe-responsive regulator Fur in iron sufficiency, as expected for an iron storage protein. Expression of dps was induced 1.5-fold in iron limitation in a Fur-independent manner, while the expression of the product of CC_0557 was unaffected by either iron supply or Fur. With respect to growth phase, while bfr expression was constant during growth, expression of dps (1.4-fold) and CC_0557 (around seven times) increased in the transition from exponential to stationary phase. Deletion mutant strains for each gene and a double dps/bfr mutant were obtained and tested for oxidative stress resistance. The dps mutant was very sensitive to H2O2, and this phenotype was not relieved by the addition of the iron chelator 2',2-dipyridyl in the conditions tested. While bfr and CC_0557 showed no phenotype as to H2O2 resistance, the double dps/bfr mutant had a similar phenotype to the dps mutation alone. These findings indicate that in C. crescentus Bfr contributes to iron homeostasis and Dps has a role in protection against oxidative stress. The role of the protein CC_0557 containing a ferritin-like fold remains unclear.
AGRADECIMENTOS Agradeço e dedico essa Dissertação à Profª Drª Marilis do Valle Marques por ter sido, acima de tudo, amiga. Por ter me orientado e ensinado em todos os momentos, por ter contribuído imensamente na execução do trabalho, apesar de todos os percalços, e por ser um exemplo em diversas ocasiões.Ao Dr. José Freire da Silva Neto, meu co-orientador informal, que desempenhou papel fundamental em grande parte do trabalho, sempre disposto a me assistir, e me ensinar sobre essa área de estudo. Ao pessoal do Laboratório de Fisiologia de Microrganismos, realçando o Dr. Ricardo Ruiz Mazzon, que cumpriu grande papel na primeira metade de minhas tarefas, e sem o qual eu sequer teria ali iniciado o Mestrado. À Heloise Balhesteros, cuja participação foi crucial na segunda metade de meu projeto, e que, ademais, representou um grande ganho pessoal, cuja amizade é deveras preciosa. No intento de não me alongar em demasia, agradeço também aos colegas de lab Carolina, Daniela, Juliana, Maristela, Valéria Italiani, Vânia e Ynés, por todo o aprendizado. Aos professores com quem tive contato durante todo esse período, pelos valiosos ensinamentos compartilhados. Em especial à Dra. Suely Gomes por ceder material biológico. Aos funcionários do ICB, em especial Íris, Alice, Bruno, Marlene e Emílio pela dedicação técnico-administrativa. À Eva Aparecida da Silva Oliveira, pela contribuição nas etapas de revisão técnica. À Helói e Maristela, meus olhos, braços e pernas nas etapas finais de confecção da Dissertação, sempre de prontidão para os momentos que demandaram auxílio. A todos os meus amigos verdadeiros e fiéis, cujos nomes não cabem citar, neste momento, mas que seguramente sabem o valor que possuem em minha vida, pessoas sem as quais o trajeto seria evidentemente mais árduo e consideravelmente menos aprazível. À minha família, base de tudo o que fui, sou e serei, cujor amor incondicional por si basta. À FAPESP e ao CNPq pelo apoio financeiro. A todos que inadvertidamente não citei, mas que exerceram papel fundamental ao longo dessa jornada."Existem muitas hipóteses em ciência que estão erradas. Isso é perfeitamente aceitável, eles são a abertura para achar as que estão certas." Carl Sagan RESUMO RODRIGUES, M. M. Estudo do papel de duas ferritinas no metabolismo de ferro de Caulobacter crescentus e sua regulação. 2012. 129 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia) -Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2012. As bactérias usam proteínas intracelulares de estocagem de ferro (ferritinas) que permitem acesso ao metal quando está em baixa quantidade. Neste trabalho, o papel das ferritina Bfr e Dps foi estudado através da análise de fenótipo de linhagens mutantes, e sua regulação foi estudada utilizando o gene repórter lacZ, em ensaios de atividade de βgalactosidase. Os resultados mostraram aumento de expressão de bfr em excesso de ferro, e que este gene é positivamente regulado por Fur. A expressão de dps teve aumento em carência de ferro e na fase estacionária. Ensaios de expressão nas linhagen...
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