In order to preserve male germoplasm, the recovery and cryopreservation of spermatozoa from the epididymides of hunted animals represents an accessible source of gametes. As a first experimental model, epididymal spermatozoa from slaughtered bulls were recovered at 30, 54, 78 and 102 h after death. The scrotal contents were stored at either 5 or 20°C. The sperm cells of each treatment (time + temperature combinations) were frozen with Triladyl (T) or Triladyl + Trehalose (TT) diluents. In order to assess sperm viability and integrity, post-thawing evaluation included individual motility, supravital stain, hyperosmotic swelling test (E+), acrosome status and sperm chromatin structure assay. Both at raw and post-refrigerated states, the sperm motility rate was higher in sperm obtained from epidydmes stored at 5°C, compared with those stored at 20°C for all collection times. Sperm collected at 102 h after death from epididymides stored at 5°C maintained a motility of 20% (120 h, raw state). When comparisons were carried out after thawing, motility was higher in the 5°C group, achieving the best results with TT diluent (7.5%) at 102 h. However, when supravital stain and E+ tests were observed, viability and membrane integrity were well preserved even at 102 h post mortem (30 and 36%, respectively, with TT diluent at 5°C). These results suggest that frozen-thawed epididymal spermatozoa could have a low motility rate while most of them remain alive. Acrosome status was not greatly affected by storage time. In a second experiment, epididymal spermatozoa from hunted red deer stags (Cervus elaphus) were recovered at 4 and 30 h after death. The scrotal contents were stored at 20°C, because that temperature is closer to field and shipment conditions. The sperm cells were frozen with TT diluent. Post-thawing evaluation included the same parameters indicated for bull spermatozoa. The assessment of spermatozoa collected at 30 hours post mortem and then subsequently frozen and thawed indicated that at this time an acceptable motility rate (35%) and viability (39.7%) were achieved. Frozen and subsequently thawed epididymal spermatozoa showed 47.9% of membrane integrity, 59.3% of acrosome integrity and 26.5% of chromatin damage, using TT diluent. A preliminary in vivo trial demonstrated that the pregnancy rate in artificially inseminated deer decreased when sperm were obtained at 30 h post mortem. According to these results, it may be concluded that storage at 5°C is better than 20°C to obtain well preserved epididymal spermatozoa from bulls, and that TT could be a useful cryoprotectant to preserve viable and fertile sperm cells after the freezing–thawing process. Before these results can be applied to assisted reproduction programs in endangered deer species, some adaptations must be developed.

Na Patagônia Norte, os ovinos têm sua estação de acasalamento iniciada em 15 de março, portanto, ficam sujeitos às temperaturas do verão. A exposição de carneiros a estresse térmico aumenta a prevalência de danos microscópicos e anomalias morfológicas nos espermatozoides, que implica uma redução na fertilidade. Este trabalho avaliou a capacidade adaptativa de carneiros Merino Australiano com lã (N = 6) e tosquiados (N = 6): metade ficou ao ar livre e outra metade foi mantida em uma câmara climática por oito horas, durante cinco dias, chegando gradualmente a uma temperatura máxima de 40 °C. Foram analisados danos microscópicos, anormalidades e alterações ultramicroscópicas da membrana plasmática e do acrossoma da cabeça dos espermatozoides. Os resultados microscópicos confirmaram a existência de diferença significativa na porcentagem de espermatozoides sem cauda e com gota citoplasmática proximal, entre os ejaculados pós-tratamento. A temperatura afetou os carneiros tosquiados, principalmente a cabeça de seus espermatozoides, durante a espermatogênese. Alterações submicroscópicas foram observados na membrana plasmática quando ela estava presente no segmento anterior: quando não intacta, ficava ondulada ou dilatada. Quando a membrana plasmática estava ausente, o acrossoma podia se apresentar ondulado ou dilatado. Além disso, sob efeito do calor, a membrana acrossomal externa pode perder completamente seu conteúdo ou apresentar núcleo desnudo. A membrana plasmática assume uma forma ondulada pelo efeito da temperatura no epidídimo. Depois de dez semanas, a cabeça dos espermatozoides recuperou sua forma normal. Como demonstrado neste estudo, a cabeça sem cauda, as gotas citoplasmáticas proximais e as categorias ultramicroscópicas estudadas são indicadores do efeito do estresse térmico no sêmen, e os carneiros com maior cobertura de lã se adaptam melhor ao estresse por calor. Alterações de microscopia e de microscopia eletrônica de transmissão têm se mostrado excelentes indicadores de estresse por calor em carneiros Merino Australiano e podem ser ferramentas úteis para ajudar criadores de ovelhas a escolher quando começar a época de acasalamento, o que irá variar de acordo com as condições ambientais do verão.