Mites of the genus Tyrophagus (Acari: Acaridae) are among the most widespread and common mites, inhabiting diverse natural and anthropogenic habitats. Some species are pests of agricultural products and stored food and/or live in house dust, causing allergies to humans. We sequenced 1.2 kb of the mitochondrial COI gene for 38 individuals belonging to seven species of Tyrophagus, including T. curvipenis, T. putrescentiae, T. fanetzhangorum, T. longior, T. perniciosus, and T. cf. similis. Molecular phylogenetic analyses (1) recovered two major clades corresponding to the presence or absence of eyespots, and (2) separated all included morphological species. Tyrophagus curvipenis and T. putrescentiae had the lowest between-species genetic distances (range, mean ± SD): 14.20-16.30, 15.17 ± 0.40 (K2P). The highest within-species variation was found in T. putrescentiae 0.00-4.33, 1.78 ± 1.44 (K2P). In this species, we recovered two distinct groups; however, no geographical or ecological dissimilarities were observed between them. Based on our analyses, we document important morphological differences between T. curvipenis and T. putrescentiae. For the first time, we record the occurrence of T. curvipenis in the New World and suggest that it may be an emerging pest as it is currently spreading in agricultural produce.

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Introducción. Los laboratorios dedicados a la producción in vitro de plantas ven afectado su trabajo, debido a la aparición de contaminantes fúngicos o bacterias en los explantes, situa- ción asociada a la presencia de plagas artrópodas como los ácaros. Objetivo. Identificar las principales especies de ácaros y la asociación de estos organismos con contaminantes, como los hongos en diferentes laboratorios comerciales de cultivo de tejidos vegetales en el Valle Central de Costa Rica. Materiales y métodos. Muestras de vitro plantas, provenientes de diversos laboratorios, con problemas de contaminación, causados por ácaros fueron llevados al Laboratorio de Acarología de la Universidad de Costa Rica para la respectiva identificación de los ácaros y los hongos asociados a estos artrópodos. Se comprobó la presencia de los ácaros en los explantes y se identificaron con la ayuda de las claves taxonómicas respectivas. Los hongos asociados con los ácaros se aislaron en medio de cultivo PDA y se identificaron con ayuda de claves taxonómicas especializadas. Resultados. Los ácaros encontrados fueron identificados como Siteroptes reniformis, Tyrophagus putrescentiae, Tarsonemus bilobatus y T. fusarii. Se encontró como principal especie a T. putrescentiae (76% de las muestras analizadas). Los hongos Mucor sp., Penicillium sp., Leptosphaerulina sp. y Cladosporium sp. se hallaron asociados con el ácaro T. putrescentiae, mientras que Nigrospora oryzae fue el único hongo relacionado con el ácaro S. reniformis. Conclusiones. Los ácaros están asociados con uno o varios hongos según la especie encontrada. Todas las especies de ácaros tienen la capacidad de diseminar las hifas o esporas de los hongos, ya sea acarreándolas sobre la superficie de su cuerpo o por medio de estructuras especializadas. Un aumento en los niveles de contaminación de los explantes cultivados in vitro, podría estar asociado con la presencia de ácaros.

Scanning electron microscopy (SEM) has been used as a tool to facilitate the morphological description of mites and to complement the information obtained from the light microscope. Unfortunately, several of SEM techniques used for soft-bodied mites such as Tyrophagus, have in many cases not shown the desired results. This investigation sought to develop an efficient procedure for preparing specimens of T. putrescentiae for SEM so that its major morphological characters could be observed and photographed. This species is the most important contaminant of tissue culture laboratories in Costa Rica. Seven methods were used to process the samples. The evaluated treatments showed differences in their ability to preserve the morphological structures of the specimens. The advantages and disadvantages of each treatment are discussed. Mites processed using ethanol were the most viable option with method 3 being the procedure that showed the best results; this technique also reduced the time and costs of processing the specimens. KEY WORDSAcari, Acaridae, Tyrophagus putrescentiae, Scanning Electron Microscopy (SEM), SEM techniques RESUMEN El microscopio electrónico de barrido (MEB) ha sido utilizado como una herramienta para complementar la información obtenida bajo el microscopio de luz. Desafortunadamente, muchas de las técnicas utilizadas con el MEB para ácaros de cuerpo suave como Tyrophagus, no han mostrado los resultados deseados en muchos casos. El presente trabajo buscó un procedimiento eficiente para observar y fotografiar bajo MEB los caracteres morfológicos más importantes de T. putrescentiae. Esta especie es el principal contaminante en cultivo de tejidos vegetales en Costa Rica. Se utilizaron siete tratamientos para el procesamiento de las muestras. Los tratamientos evaluados mostraron diferencias entre sí con respecto a la preservación de las estructuras de los especímenes. Se discuten las ventajas y desventajas de cada procedimiento. Los tratamientos con etanol fueron la opción más viable para procesar estos ácaros, siendo el tratamiento 3 el que mostró mejores resultados. Asimismo, esta técnica permite reducir tanto el tiempo como los costos durante el procesamiento de los especímenes. PALABRAS CLAVEAcari, Acaridae, Tyrophagus putrescentiae, Microscopio Electrónico de Barrido (MEB), Técnicas MEB